冷应激对雏鹅ha和hpt轴活性影响及其相关基因表达调控的研究.pdf

中文摘要 应激是机体对各种刺激所产生的一种非特异性应答反应。劣性应激可引起畜 禽生产性能下降，诱发多种疾病，甚至造成死亡。寒冷是雏禽最普遍的应激原之 一，由此引起的直接和间接经济损失是制约北方畜牧业发展的重要因素，研究动 物冷应激发生机制，探索科学的应激监测方法，对提高应激预防水平，保障畜牧 业发展有重要意义。冷应激对动物HPA和HPT轴为主的神经内分泌系统产生重要 影响。然而未见冷应激对雏鹅HPA、IIPT轴的影响及其相关基因表达调控的研究 报道。本研究以7日龄皖西白鹅为试验对象，研究于12℃士1℃条件下进行急性冷 cDNA序列，并进行生物信息学分析。为深入研究动物冷应激机理，动物冷应激的 早期监测和防治提供重要实验依据。研究主要取得如下成果： 1．雏鹅受到冷应激时血相指标变化的测定结果 以7日龄皖西白鹅为试验对象，研究于12℃士1℃条件下进行急性冷应激对皖 西白鹅雏鹅某些血相指标变化的影响。研究结果表明，全血中红细胞(RBC)、红 恢复正常，雏鹅已经开始适应。首次获得了皖西白鹅血液生理指标参考值，为兽 2 一 医临床诊断与治疗提供了重要依据之一。 2．雏鹅冷应激时m)A、}Ⅱ)T轴应激激素测定的结果 研究于12℃士1℃条件下进行急性冷应激处理时对雏鹅下丘脑．垂体．肾上腺皮 FT3在冷暴露 质(HI)A)轴和下丘脑．垂体．甲状腺(HPT)轴的影响。结果表明， 血 到峰值。Cor在冷暴露3h时显著升高(PD．05)，并在冷暴露期间保持高水平。 清中ACTH随冷暴露时间延长而逐渐升高，在冷应激6h时显著高于应激前的水平 和FT3反应敏感，初步认为它们可以作为评估冷应激程度的辅助指标。 3．雏鹅冷应激反应中HPA、HPT轴应激激素相关基因表达调控规律 与应激结束后1h、6h和12h显著升高，其他时间内均下降到室温时的转录水平。垂 到最高点，而其他应激时间均降低到应激前的水平，应激结束后lh至06h期间垂体 录水平在冷应激1．5h．9h、18h时显著升高，其他时间点均迅速下降到应激前水平； 又显著升高，其他时间点降到应激前的正常水平。 3 CRH和ACTH基因均是冷应激反应时的正调控基因。 4．鹅HSP70基因的克隆和生物信息学分析 bp 只有1个蛋白质位点的差异，编码区同源性序列比对，与乌棕鹅同源性达99％， 保守性。 质以亲水性区域为主；该蛋白具有丰富的B细胞抗原位点；抗原表位区域、柔韧 性区域和表面可能性区域出现了较多的重叠区，这些区域相对易于形变， 便于抗 原、抗体的自由结合，可能是抗原位点的富集区；该蛋白二级结构以a．螺旋和无妒 规则卷曲为主，无明显的跨膜螺旋，含有34个磷酸化位点，无糖基化位点，推测 其可能在细胞信号转导与调控中发挥重要作用。 5．雏鹅冷应激反应中心T、HPTA轴HSP70mRNA的动态表达规律 实时荧光定量逆转录PCR法检测结果表明，下丘脑HSP70mRNA转录量在冷 处理结束后6h内HSP70mRNA转录水平均显著升高，应激结束后6h转录水平最 高，随后又迅速下降到室温下的转录水平。垂体HSP70mRNA转录量在冷应激 束后0．5h、3h和6h转录水平也被显著降低，随后逐渐升高到应激前的正常水平。 甲状腺HSP70 mRNA转录量在冷应激0．5h时显著升高，随后迅速下降到应激前的 4 一 间恢复到应激前的水平。冷应激期间及结束冷处理后一段时间，肾上腺HSP70基 然不超过1，推测HSP70基因也是肾上腺组织细胞表达的下调基因，是负调控的。 雏鹅冷应激反应中，HSP70基因在下丘脑、垂体、甲状腺和肾上腺中的表达规律 是不同的，在不同的组织中有不同的调控规律。下丘脑HSP70mRNA转录水平最 高，表达量总体呈现明显上升趋势，是冷应激反应时的正调控基因；而它在垂体、 甲状腺和肾上腺中的表达总体是被抑制的，是垂体、甲状腺和肾上腺