斑马鱼几种cy基因在性腺不同发育时期的表达研究.pdfVIP

Thesis For The Degree Of Master Studies on the expression of a few kinds of CYP genes in the different phases of gonad development in zebrafish Supervisor ：Prof.Qiu Xuemei Master Candidate ：Chen Xiaohong College of Fisheries and Life Science Dalian Ocean University Dalian, Liaoning Province, P.R. China 2 摘要 摘 要 斑马鱼 （Danio rerio ，Zebrafish ）是发育生物学和遗传学研究的理想模式生物，由于它具有果蝇、 小鼠等模式生物不可比拟的优点例如繁殖能力强，体外受精，胚胎透明，性成熟周期短，可追踪整个胚 胎发育过程，因此特别适合与发育及性别决定、分化相关基因表达及功能的研究。 细胞色素P450 （cytochromeP450，CYP450 ）超基因家族是一类编码参与一些内源性物质(如激素、 胆固醇)和外源性物质（如药物、环境化合物）代谢的酶系的超基因家族。CYP450 基因编码的CYP450 酶属于血红蛋白酶类，是一类以血红素为辅基的细胞色素蛋白酶超家族，广泛存在于生物体内。 斑马鱼中共存在94 种CYP450 基因，分布于18 个基因家族，而且这些基因家族同样存在于哺乳动 物。在CYP 基因家族CYP5-CYP51 中有32 个与人类的CYP 基因同源，并且这些基因多与生物体内激 素代谢酶有关，例如CYP11、CYP17、CYP19 、CYP21、CYP51 它们分别编码的胆固醇侧链剪切酶P450scc、 17α-羟化酶/C17 ，20 裂解酶、芳香化酶、类固醇21-羟化酶和羊毛甾醇14α-去甲基酶，这些酶在生物体 内激素代谢密切相关。 本研究运用斑马鱼性腺组织石蜡切片方法对斑马鱼性腺进行发育时期的判断，取斑马鱼性腺成熟前 期，成熟期，成熟后期为样本，用实时定量PCR 技术，研究CYP11a1、CYP17a1、CYP17a2、CYP19a、 CYP19b、CYP21、CYP51 在四种组织和性腺各个发育时期的表达情况。成鱼CYP11、CYP17、CYP19、 CYP21、CYP51 基因组织表达结果显示，这些基因在卵巢、精巢、肌肉和脑四种组织中均有表达，但 CYP19a 在肌肉中无表达，其余基因表达如下：CYP11a1 表达量卵巢精巢肌肉脑；CYP17a1 表达量 肌肉精巢卵巢脑；CYP17a2 表达量精巢肌肉卵巢脑；CYP19a 表达量卵巢精巢脑；CYP19b 表 达量脑精巢肌肉卵巢；CYP21 表达量肌肉精巢脑卵巢；CYP51 表达量精巢脑肌肉卵巢。 实时荧光定量 PCR 研究结果显示，这几种基因在斑马鱼性腺发育成熟前期、成熟期、成熟后期三 个时期的表达规律不同。CYP11a1 在卵巢三个不同发育时期的表达量表现为成熟前期成熟后期成熟 期，呈先降低再升高的趋势；在精巢三个不同发育时期的表达量表现为成熟期成熟前期成熟后期， 呈先升高后将低的趋势。CYP17a1 在卵巢三个不同发育时期的表达量表现为成熟前期成熟后期成熟 期，呈先降低后升高趋势；在精巢三个不同发育时期的表达量也表现成熟前期成熟后期成熟期，与 卵巢中呈现相同趋势。CYP17a2 在卵巢三个不同发育时期的表达量表现为成熟前期成熟期成熟后期， 在整个过程中呈现递减趋势；在精巢三个不同发育时期的表达量表现为成熟后期成熟期成熟前期， 与其在卵巢中相反的趋势。CYP19a 在卵巢三个不同发育时期的表达量表现为成熟后期成熟期成熟前 期，在整个过程中呈现递增趋势；在精巢三个不同发育时期的表达量表现为成熟前期成熟期成熟后 期，表现