甜菜夜蛾抗多杀素的机理研究.pdf

致谢 本论文是在导师莫建初教授的悉心指导下完成的。三年来，导师在学业和生活等各方面给弟子 以无限的教诲和关怀，导师严谨的治学态度、新颖的科研思路、孜孜不倦的事业追求、忘我的工作 精神、豁达大度的学者风范给弟子深刻的影响著使弟子受益终生。感谢师母龙水琼老师在学业和生 活方面给予的帮助和关怀。在本论文完成之际，谨向两位老师表示最崇高的敬意和衷心的感谢! 在浙江大学昆虫所学习的三年中，得到多位老师的关心和指教。特别感谢程家安教授、胡萃教 授、何俊华教授、刘树生教授、陈学新教授、祝增荣研究员、沈志成教授、蒋明星教授、唐启义教 授、娄永根教授、叶恭银教授、施祖华教授、张传溪教授、徐志宏教授、姚洪渭副教授、刘银泉副教 授、余虹副教授、马云副教授等的支持和帮助。 中国科学院上海植物生理生态研究所的唐振华研究员和庄佩君高级实验师为本实验提供所需的 昆虫品系，在此特别感谢。 本论文的完成离不开本实验室其它同学的帮助和支持，感谢杨天赐、滕立、邓天福、王争艳、 张时妙、潘程远、何黄英、陈春润、程梦林、张小斌对我的帮助和鼓励。感谢鲁玉杰、纠敏、安世 恒、杜梦芳和吴志毅对我的帮助。同时感谢巩中军、杨琼、徐莉、康桂娟、王娜、王光华、花小燕 等在实验过程中给予的关心与照顾，以及学友汪海燕、邢丽萍等给予的生活关心与照顾。感谢关心、 支持和帮助我的老师、同学和朋友! 在此论文完成之际，我要特别感谢我的父母和弟弟王栋在我的求学生涯中给予我这么多的关怀 和支持，使我能顺利完成学业。感谢丁矛在这三年的学习、生活和实验中给予我的支持和鼓励。 感谢参与本论文评阅、答辩的所有专家和学者! 王 伟 2006年5月于浙江大学 甜菜夜蛾抗多杀菌素的机理研究 中文摘要 Hubner)是一种世界性分布、间歇性大发生的，以危害蔬菜为主 甜菜夜蛾(Spodopteraexigua 的杂食性害虫，对农业生产造成巨大危害。长期的化学防治，甜菜夜蛾已对许多类杀虫剂产生了很 高的抗药性。多杀菌素是一种作用机制独特的新型杀虫剂，对甜菜夜蛾的防治效果显著，但是近年 来发现甜菜夜蛾已对多杀菌素产生了一定的抗药性。但是甜菜夜蛾对多杀菌素的抗性机制的研究很 少，本研究选用上海市郊的甜菜夜蛾进行了室内敏感和抗性品系的筛选，对甜菜夜蛾抗多杀菌素的 机制进行了初步的研究，主要结果如下。 采用浸叶法进行抗性品系的筛选，当筛选到第5代时，抗性是敏感的345．4倍，可以看出甜菜夜 蛾对多杀菌素的抗药性发展速度较快，易产生高抗性。选用氰戊菊酯、辛硫磷、灭多威、甲氨基阿 维菌素、氟氯氰菊酯等5种不同类型的药剂对多杀菌素进行交互抗性的测定，结果显示这些药剂均对 6倍，抗性品系分别增效9．8、15、2．6、 杀菌素的增效作用，敏感品系分别增效0．7、O．5、1．0、0 化酶o-脱甲基进行了酶活测定，结果GST在抗性品系和敏感品系中活性没有显著变化，活性比为1．0 倍；抗性品系的多功能氧化酶o_脱甲基活性是敏感品系的5．2倍，表明甜菜夜蛾对多杀菌素的抗性与 谷胱甘肽s一转移酶无关，可能与多功能氧化酶沪脱甲基活性增高有关。 以5龄甜菜夜蛾抗性品系的总RNA为模板，采用一对昆虫细胞色素P450简并引物，利用反转录一 多聚酶链式反应(RT—PCR)扩增并筛选出2个新的长度约450bp的甜菜夜蛾细胞色素P450基因cDNA片 段，并对这些序列进行了生物信息学分析。结果显示，这2个P450基因片段分别属于细胞色素P450 CYP4家族的CYP4S和CYP4G2个亚家族，二者分别命名为SecypgsS-J丑拜Ⅱ曲聊《筘』o雠因。其中 前一个基因片段的长度为441 bp，推导的氨基酸序列长度为146个氨基酸残基；而后一个基因片段的 长度为456bp，推导的氨基酸序列长度为151个氨基酸残基。 本研究利用荧光定量PCR技术对克隆得到的2个细胞色素P450基因在不同品系甜菜夜蛾体内的 表达水平进行了检测。我们重新设计了荧光定量PcR引物，然后利用绝对定量的方法检测了这2个基