家蚕和野桑蚕对机磷农药抗性的研究.pdf

家蚕和野桑蚕对有机磷农药抗性的研究 家蚕和野桑蚕对有机磷农药抗性的研究 中文摘要 mandarina)具有共同的起源，家蚕的 家蚕(Bombyxmori)和野桑蚕(Bombyx 人工驯化历史已经有5700多年，经过长期的人工选择，家蚕的产丝性能得到了大幅 度的提高，但对环境的适应性出现了退化的趋势；野桑蚕长期栖息在野外的桑树上， 经过自然选择和农药的压力选择，其对野外环境的抗性，特别是对农药的抗性表现增 强的趋势。一方面，家蚕由于对农药的抗性弱，每年都造成大量的农药中毒现象，有 的蚕区已经放弃秋蚕的饲养；另一方面，野桑蚕由于对农药的抗性在增强，严重危害 桑叶的生产，成为制约蚕丝业健康发展的一对矛盾。为了比较研究家蚕和野桑蚕对有 机磷农药抗性差异的分子基础，本文以家蚕品种大造和苏州系统的野桑蚕为研究材 料，比较研究了家蚕和野桑蚕对辛硫磷农药的敏感性、乙酰胆碱酯酶 产物对毒扁豆碱的敏感性。 以家蚕和野桑蚕的各龄起蚕为实验材料，采用浸叶法，研究了l～5龄家蚕和野桑 蚕对辛硫磷农药的抗性的差异。结果表明，小蚕期家蚕和野桑蚕对辛硫磷的敏感性差 异相对较小，随着龄期的增大，家蚕和野桑蚕对辛硫磷农药的敏感性差异较大，野桑 蚕4龄三C50为家蚕的4．43倍，5龄为家蚕的4．02倍。 为了研究家蚕和野桑蚕的AChE的活性及毒扁豆碱对其抑制中量(／5D)差异，本 文以家蚕和野桑蚕2龄起蚕及5龄第3d的头、中肠、脂肪体和丝腺为实验材料，测 定了AChE的酶活性和厶D。结果表明，野桑蚕2龄起蚕的酶活是家蚕的1．65倍；5 龄第3d野桑蚕和家蚕的头、中肠、脂肪体和丝腺的酶活之比分别为：1．90倍、2．23 5．23×10～M。 构建了野桑蚕脑组织的eDNA文库，经鉴定文库的滴度达3．5x105 pfu／mL，文库 家蚕和野桑蚕对有机磷农药抗性的研究 中文摘要 插入片段的平均大小为1．2kb。从文库的测序结果中获得野桑蚕化学感受蛋白基因 该基因读码框由384个核苷酸组成，编码127个氨基酸，分子量为14．6kD。通过对 该基因编码的氨基酸和其它17种昆虫的CSP编码的氨基酸进行进化分析，发现该基 因与家蚕的CSP3的同源性最高，达96．85％。该基因的发现对于研究家蚕和野桑蚕对 化学农药的敏感性具有重要意义。 025 分析表明：Bin-acel的ORF包含碱基2 bp，编码683个氨基酸，推导其表达蛋白 的分子量为76．955 917 kD，等电点(pI)为6．36；Bm，ace2的ORF包含碱基1bp， 编码638个氨基酸，推导其表达蛋白的分子量为71．675 kD，等电点(pD为5．49； 的 ． 84％ Bm-acelBmace2 9同源关系最近，为9)6定63别。依据家蚕基因组信息，将73分0100．．和． 位 于第15号和第9号染色体，为深入研究家蚕对有机磷农药的抗性机制打下基础。 为了进一步研究野桑蚕和家蚕对辛硫磷农药的抗性差异的分子基础，采用了 ofeDNA ends)方法，克隆了野桑蚕两种AChE RT-PCR、RACE(rapid-amplification 的eDNA