酶和细胞固定化资料.ppt

* * * * * * * * 葡萄糖＋醌＋H2O 葡萄糖酸＋氢醌 葡萄糖氧化酶 氢醌 醌＋2H＋＋2e－ Pt 铂电极 Glucose Gluconic acid Glucose oxidase Oxygen Hydrogen peroxide Membrane Electrode 根据反应中消耗的O2、生成的葡萄糖酸和H2O2的量，可以用氧电极、pH电极和H2O2电极来测定葡萄糖的含量。 葡萄糖酶电极结构示意图 葡萄糖酶电极的敏感膜是葡萄糖氧化酶（GOD），它被固定在聚乙烯酰胺凝胶上。在酶膜的作用下葡萄糖发生氧化反应，消耗掉氧而生成葡萄糖酸和过氧化氢。通过用电极测量被消耗的氧或生成的过氧化氢就可了解葡萄糖浓度。 手掌型葡萄糖(glucose)分析仪 脲电极 Urea + 2H2O 2NH4++2HCO3- 脲酶 产生的2NH4+为阳离子电极感应。 此外还有： 氨基酸电极 醇电极 尿酸电极 乳酸电极 青霉素电极 亚硝酸离子电极：菠菜亚硝酸还原酶产生NH3 一些常见的酶电极 底 物 酶 电 极 5′－腺苷酸 5′－腺苷酸脱氨酶 NH4+ 乙醇，醇 乙醇脱氢酶 Pt 过氧化物 过氧化氢酶 Pt (O2) 磷酸葡萄 硫酸酯酶+葡萄糖氧化酶 Pt (O2) D-氨基酸 D－氨基酸氧化酶 NH4+ L-氨基酸 L－氨基酸氧化酶 NH3 蔗糖 蔗糖酶+葡萄糖氧化酶 Pt (H2O2) 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 Pt (O2) 硫酸酯 芳基硫酸酯酶 Pt 硫氰酸 硫氰酸酶 CN－ 硝酸盐 硝酸盐还原酶/ 亚硝酸盐还原酶 NH4+ 亚硝酸盐 亚硝酸盐还原酶 NH3（气体） 草酸 草酸脱羧酶 CO2（气体） 青霉素 青霉素酶 pH 乳酸 乳酸脱氢酶；细胞色素b Pt，Fe（CN）-4 L－氨基酸 脱羧酶 CO2 L－精氨酸 精氨酸酶 NH4+ L－天冬酰胺 天冬酰胺酶 NH4+ 微生物传感器 微生物传感器已成功用于测定葡萄糖等可发酵性糖、甲酸、乙酸、甲醇、乙醇、头菌霉素、谷氨酸、氨、硝酸盐、生化需氧量（BOD）、细胞数量等。 　　继酶传感器（enzyme sensor）后，又出现： 细胞器传感器（cell organelle sensor） 组织传感器（tissue sensor） 微生物传感器（microbe sensor） 免疫传感器（immunosensor） 德国研发的环境废水BOD分析仪 呼吸活性测定型微生物传感器 利用固定在高分子膜上的微生物细胞的呼吸作用，通过测定氧的消耗和二氧化碳的生成，从而确定被测定物质的量。这种类型的传感器由固定化微生物膜和氧电极或二氧化碳电极结合而成。 电极活性测定型微生物传感器 利用固定在膜上的微生物细胞的新陈代谢作用，通过测定电极活性物质的量的变化，从而确定样品中预测物质的含量，这种类型的传感器由固定化微生物膜与生物燃料电池、离子选择电极和气体电极等组成。 酶传感器的应用 水质监测 用化学法测定酚时，硫化物、油类等可干扰其测定。从马铃薯中提纯、经吸附交联得到的固定化多酚氧化酶与氧电极构成酚传感器，可检测大多数酚类化合物。 医疗方面 葡萄糖传感器和血糖测定仪 用葡萄糖氧化酶（glucose oxidase,GOD）制成葡萄糖传感器，可测定血液中葡萄糖浓度。 手掌型葡萄糖(glucose)分析仪 SBA-50型单电极生物传感分析仪 SBA-70型血糖乳酸自动分析仪 食品鲜度 鱼鲜度传感器 在日本、加拿大等国广泛用于鱼类鲜度的测定。鱼死后体内ATP经酶解依次形成ADP、AMP、IMP、肌苷、次黄嘌呤和尿酸。鲜度可用K值表示： K=肌苷+次黄嘌呤/ ATP +ADP+AMP+IMP +肌苷+次黄嘌呤+尿酸 大多数鱼死后5～20h，ATP，ADP和AMP已分解尽，超过24h，鲜度主要取决于IMP--肌苷---次黄嘌呤---尿酸。 将这三个步骤的三种酶（5’－核苷酸酶、核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶）固定在氧电极上，制成鱼鲜度测定仪。 当K＜20时，鱼极新鲜，可供生食。 K在20～40之间为新鲜，必须熟食。 K大于40，不新鲜，不宜食用，这与嗅觉检验结果相一致。 肉鲜度传感器 肉类在腐败过程中会产生各种胺类，故胺类测定能反映肉类的新鲜程度。 用腐胺氧化酶与过氧化氢电极构成多胺生物传感器，或用单胺氧化酶膜和氧电极组成的酶传感器测定肉在贮藏过程中的鲜度。 污染微生物及病原菌的检测 　　通过免疫学方法，即获得相应的特异性抗原和抗体进行分析和检测。 (1)将适宜的酶与抗原或抗体结合在一起。制成酶标抗体（或酶标抗原 ）； (2)将酶标抗体