在苏云金芽胞杆菌中高效和稳定表达AiiA蛋白.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(10):2221-2226 Scientia Agricultura Sinica 在苏云金芽胞杆菌中高效和稳定表达AiiA蛋白 吴怀光，叶伟星，喻子牛，孙 明 （华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070 ） 摘要：【目的】摸索提高 AiiA 蛋白对 AHLs 分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的 抑制能力的方法。【方法】苏云金芽胞杆菌的 AiiA 蛋白是一种胞内蛋白，能降解参与诱导调控多种植物病原菌致 病基因表达的 N-乙酰高丝氨酸内酯信号分子。本文采用两种方式来提高 AiiA 蛋白的活性，即利用苏云金芽胞杆 菌S-层蛋白在细胞表面表达该蛋白以及利用苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因 cry3Aa 启动子来提高 aiiA 基因的 表达量。为此构建该蛋白基因与细胞表面 S-层蛋白的锚定区结合而成的融合蛋白基因 slh-aiiA 以及带有基因 cry3Aa 启动子的融合基因 pro3A-aiiA。为了提高表达的稳定性以及去掉重组菌中非苏云金芽胞杆菌片段，本文构 建了解离载体 pBMB5401，并将上述两个融合基因单独或同时装入解离载体 pBMB5401，分别得到重组质粒 pBMBcaiiA，pBMB3aiiA 和 pBMB3439。转化苏云金芽胞杆菌无晶体突变株 BMB171，随后导入温度敏感型辅助质粒 pEG922，重组质粒在整合酶的作用下发生体内重组，消除了抗性基因等非必需片段。【结果】得到 3 个重组菌 BMBcaiiAR，BMB3aiiAR和BMB3439R，在无抗性选择压力下的稳定性均在90%以上。融合蛋白SLH-AiiA及pro3A-AiiA 在解离后的重组菌中得到表达，具有对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制 能力。【结论】在苏云金芽胞杆菌中高效和稳定表达 AiiA 蛋白,可增强其对 AHLs 分子的降解活性和对胡萝卜软腐 欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力，当同时结合两种方式来表达AiiA蛋白时效果最好。 关键词：苏云金芽胞杆菌；AiiA蛋白；融合蛋白；解离载体 High Efficient and Stable Expression of AiiA Protein in Bacillus thuringiensis WU Huai-guang, YE Wei-xing, YU Zi-niu, SUN Ming (State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Life Science and Technology,Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070) Abstract: 【Objective 】The aim of this study is to grope associated methods in improving the protein AiiA ability of AHLs inactivation and restraint to the potato soft rot disease caused by Erwinia carotovora . 【Method 】In this study, AiiA was displayed on cell surface by means of S-layer protein and its expression was boosted by promoter of cry3Aa gene, then aiiA gene was fused into Xba I site of ctc gene and SpeI site of cry3Aa gene respectively, obtaining