东北梅花鹿鹿茸dna文库的构建及初步鉴定.pdfVIP

‘ 摘要 摘要 本试验为克隆出与鹿茸生长发育相关基因的全长序列，采用SMART技术构建了东北 梅花鹿鹿茸尖端组织的全长cDNA文库。采取人T$11养的健康4岁东北梅花鹿为试验动 Total 物，取其生茸期鹿茸尖端组织为实验材料，利用SV RNA抽提试剂盒分离提取和纯 水解、纯化后，用Sill酶切；将酶切产物通过CHROMA E．coli．DH5a高效感受态细胞中，建成原始文库；鉴定文库的滴度和重组效率后，进行文 库扩增；随机挑取单菌落噬菌斑，用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增，以 晰明显无降解，总RNA质量好、纯度高，符合建库要求。经鉴定，文库得到约 2．56x 选，成功的构建了东北梅花鹿鹿茸cDNA文库。 东北梅花鹿鹿茸生长中心组织cDNA文库的成功构建，不仅保存了珍贵的梅花鹿基 因资源，也为以后EST测序分析，基因表达谱构建，分析功能基因在鹿茸组织生长发 育不同时期的表达奠定了前期基础。 关键词东北梅花鹿；鹿茸；cDNA文库 Abstract Abstract Inordertoseparate functionalof extractedtotalRNAfrom specific genesvelvet，we velvet of tissueSika artificial RNAwas deer C top n．horrulorum und