小麦抗白粉病基同源序列的分离鉴定及分子标记的研究.pdfVIP

摘 要 小麦白粉病是我国小麦的主要真菌病害之一，由白粉病菌 Erysiphegraminis DC 引起，近年来危害日趋严重。【培育抗病品种是防治病害最为经济、安全和有 ＼ 效的措施，而抗病基因的研究则是抗病育种的基础。迄今为止，己报道小麦抗白粉 病基因28个位点45个主效基冈，分别定位在小麦不同染色体上，而且已找到了其 ～，’y一 中部分基因的分子标记。然而至今仍未有一个小麦抗白粉病基因成功克隆J本研究 ， 列的候选基因法，采用RT．PCR技术，对其进行筛选，并对其中部分cDNA片段克 的小麦抗白粉病近等基因系以及含有未知抗白粉病基因的复壮30为材料，利用己 一 ， ＼ ／ 一 口、I 类基因序列在抗感材料之间存在10个单碱基差异。根据第158位单碱基差异设计 的引物在抗感材料间获得了差异片段。接种72hrs后RGA．I1引物的扩增带消失， 而引物RGA2的扩增片段明显大于接种前的扩增片段。推测经白粉病菌诱导后该基 因mRNA的转录后拼接发生了变化。表明该基因参与了小麦的抗病反应。利用中 国春缺体．四体系将克隆片段定位在小麦1D染色体上，证明其不属于Pr02基因。2 因的同源性达99％，但在抗感材料问不存在任何差异，无法断定其是否与抗病相关。 3 应用RPW8IC引物从小麦基因组中扩增获得了核糖基化因子基因片段，而且其 ＼ I 物WMC201与Pm21基因所在的易位片段的遗传距离为27cM。rlr一一 关键词TritiezMnPjtiv“Ⅲ，Mlo基因：NBS．LR矗?’RT．PC意NILvRGA… 本文所引用的缩写词 LengthPolymorphism Fragment AFLP：扩增片段长度多态性 Amplified BSA：集团分离分析 Bulk Analysis Segregated SequenceRepeat cSSR：编码的简单序列重复 CodingSimple DR：防p反麻 Deferise Response Tags Sequence EST：表达序列标签 Expressed Response HR：过敏反应 Hypersensitive LRR：富亮氨酸重复 Leucine-rich Repeat Lz：亮氨酸拉链 Leucine Zipper Site NBS：核苷酸结合位点 Nucleotide Binding NIL：近等基因系 NearLine lsogenic Kinase PK：蛋白激酶 Protein MildewResistanceGene Pm：抗白粉病基因 Powdery Related PR：病程相关 Pathogenesis DNA RAPD：随机扩增多态性DNA RandomlyAmplifiedPolymorphic RFLP：限制片段长度多态性 Restriction FragmentLength Polymorphism Gene RGA：抗病基因类似物 Resistance Analog PCR RT-PCR：反转录PCR Reverse Transcript SAR：系统获得性抗性 SystemAcquiredresponse SNP：单核苷酸多态性 SingleNucleotide Polymorphism SSR：简单序列重复 SimpleSequence Repeat TIR：Toll白介素．1区域 Toll．Interleukin．1 Region Domain TM：跨膜结构域 Transmembrane 第一部分文献综述 第一章植物抗病基因研究进展 植物病害是农业生产的主要限制因子之一。植物抗病性及其机制研究一直是 植物病理学和植物抗病育种中的热点研究问题。多年来人们应用遗传图谱和分子标 记技术，已经对一些主要农作物的重要抗病基囚进行了定位和遗传学研究，如水稻 抗稻瘟病基因m2^“51，小麦抗白粉病基因m7“l等。但是直到1992年植物抗病 基因的研究才真正取得突破性进展，从在玉米中克隆到胁”p1基因至今已有20多 个抗病基因被克隆出来。抗病基因的成功克隆和对抗病基因的分析，大大深化了人 们对抗病性的认识，使抗病性机制的研究有了突破性进展，同时为利用基因工程手 段控制植物病害展示了广阔的前景。 1植物抗病的分子机制 植物在生长发育过程中常受到一些病原物的侵袭，表现为抗病或感病，在长 期的相互作用及相互选择、协同进化的过程中，植物逐渐获得了一系列复杂的防御 机制来保护自己。这种机制既有专一性的抗性，也有非专一性的抗性，有的表达为 组成型的抗性，有的表达为诱导型的抗性。寄主植物可采用多种方式来抵御病原的 侵染，如先生的物理化学结构作为植物抗病的第一道屏障在植物抗病反应中起重要 作用。这就