拟南芥cbf1cbf4基因及启动子的克隆与植物表达载体的构建.pdf

摘 要 植物的生长发育多受到各种环境因子的胁迫，低温和干旱成为主要的逆境胁 迫因子。紫花苜蓿是多年生栽培牧草，号称“牧草之王。它不但营养丰富、适 应性广、适口性强而且可以增加土壤肥力，但苜蓿的生长发育也同样受到低温 和干旱环境因子的胁迫。因此选育高抗优质的苜蓿品种成为育种工作者亟待解决 的问题。 为研究上述基因家族里的其中的两个基因CBFl、CBF4对我国优良豆科牧草 二一苜蓿的抗寒、抗旱性的改良作用，本论文从拟南芥植物中利用PCR方法分离 得到了上述两个基因及CBFl的启动子，并且分别构建了由CaMV35s启动子和来 目的奠定了坚实的基础。 研究获得的初步结果：1、通过PCR方法筛选出能够稳定分离基因CBFl的引 物对一：通过PCR方法筛选出能够稳定分离CBFI基因启动子的引物对三；通过 PCR方法筛选出能够稳定分离基因CBF4的引物对五。2、通过PCR方法从拟南芥 基因组DNA中分离得到冷诱导转录因子cBFl基因、CBFI基因特异性启动子、CBF4 基因3、通过基因分离、验证、测序、质粒提取、酶切、回收连接、转化、筛选、 电击转化等一系列载体的构建方法构建植物表达载体PBll21-CBFl、 PBI—PRo-CBFl、PBI-CBFI-PRO、PBI