2 细菌的分离培养.pptVIP

实验二 细菌的分布和分离接种 1.示教： a.紫外线杀菌试验； b.噬菌体溶菌试验 c.细菌的变异现象 2.自做: a.细菌的分离接种技术 b.细菌的分布实验 c.咽拭子血平板培养（新开实验） 3. 实验报告2：细菌的分布实验，咽拭子血平板培养 紫外线杀菌的原理 细菌分布试验 目的：通过实验使学生们认识到微生物广泛存在于自然界 材料：普通琼脂平皿，无菌棉棒，无菌生理盐水， 碘酒酒精等。 （每人1小号普通平板） 步骤： 1.手指皮肤消毒前后细菌的检查： 取培养基1个，在底部用记号笔标记消毒前及消毒后。 实验者在标有消毒前的培养基表面用待检手指画十字。 用碘酒，酒精消毒手指皮肤后，再在标有消毒后的部分画十字。 贴好班级姓名标签，送孵箱培养，下次课看结果。 细菌分布试验 2. 物体表面细菌的检查： 取无菌棉棒在无菌盐水中浸湿，再在管壁上挤干水。 将湿棉棒擦拭室内物体表面（如桌、椅、笔、水池等）取材。 取培养基1个，将标本轻轻涂抹在培养基表面，且勿划破培养基。 标记后送孵箱培养。 细菌分布试验 3.空气细菌检查： 取培养基1个，放在实验室的适当位置打开盖，置空气中暴露 20分钟。 标记好后放孵箱中培养，下次实验看结果。 2 细菌的分离培养，纯种细菌接种技术 A 细菌的分离培养技术 a 目的：使学生掌握细菌的分离培养技术及其作用 细菌广泛存在于自然界、且种类多，被检标本如粪便、痰、脓、等常含一种以上的细菌，临床上要诊断患者是哪一种细菌感染致病，或我们要专门研究某种细菌，就必须得到细菌的纯培养，要达此目的首先必须将混杂的细菌分离。 细菌的分离培养技术有多种，常用的有平板划线法和倾注平板法。 b材料: 1.菌种：葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液 2.培养基：普通琼脂平板（每人1普通平板） 3.其它：接种环，酒精灯等。 平板划线法（又称分离培养法） 平板划线的方法有 连续曲线划线法 间断划线法 分区划线法 分格划线法 其中以分区划线法与曲线划线法较为常用。 C.步聚（连续间断划线法）： 1.烧灼接种环，待冷（约3-5秒种），取一环混合菌液。 2.左手抓握底朝上的琼脂平板，反转过来使平板盖朝上（如图2-1）并靠近 火焰周围。右手持接种环在琼脂培养基表面的12点钟处，涂一薄膜。再 烧灼接种环，同时将平板倒置桌上。 3.左手如上抓握琼脂平板，待接种环冷却后（接种环是否冷却，可将其置 于靠平板边的琼脂表面，如琼脂熔化，则需再冷却）经过薄膜作连续划 线，划线时要用腕力轻轻地滑行，接种环面与琼脂表面成30-40度角，划 线要密但不重叠，每次要划至平板的边缘。如此划至琼脂的1/3。此时再 烧灼接种环，待冷后，重复前次末端2-3根线再向下连续划线至琼脂的2/3 。烧灼接种环，待冷后，重复前次末端2-3根线再向下连续划线完琼脂。 然后将平板倒置桌上。烧灼接种环。 4.在平板的底玻璃上用蜡笔（或小纸片）注明接种的菌名、接种者姓名、 班、组、日期等。倒置于37℃培养箱中培养。 5.24小时培养后取出，观察各种菌落。注意其大小、形态、边缘、表面、 透明度、颜色等。 3.咽试子的血平板培养 a目的: 证实咽部和扁桃体有无细菌存在。 b材料： ? 咽拭子培养管、血琼脂平板（1人1个）、酒精灯、接种环、无菌棉签等 c步骤: 取一无菌棉签， 另取两只棉签压舌，用棉签越过舌根到达咽后壁或悬雍垂后侧或咽喉部， 发红、灰白色可疑假膜部位，反复涂抹数次后小心退出，拭子退出时注意 避免接触口腔黏膜、舌头等部位。 将所取拭子在血平板靠近边缘处涂抹。 取接种环，烧灼灭菌，从涂抹标本处开始，三段式分离划线接种法划线， 每划一段要烧灼灭菌。 做好标记（姓名，咽拭子），37 ℃，培养24h。 实验报告二 细菌的分布实验； 咽拭子血平板培养 目的， 材料， 步骤， 结果记录（下次课看结果） 讨论： 1. 本次咽拭子血培养结果说明什么？ 2. 本次咽拭子血培养的主要细菌是什么？其它对人体健康有何影响？ * * 示 教： a.紫外线杀菌试验； b.噬菌体溶菌试验 c.细菌的变异现象 波长为240-300nm的紫外线有杀菌作用，其中波长为256nm的紫外线效果最好。其杀菌原理是此波长范围的紫外线可被细菌的DNA 吸收，并使相邻的两个胸腺嘧啶形成二聚体从而损伤细菌的DNA。 图2-1 平板培养基的握持法 图2-2 连续间断划线法（左）和分