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五价钒酸盐对人肺腺癌(A549)细胞组蛋白修饰的影响 五价钒可能具有致癌性，最近研究表明可引起细胞的恶性转化，但是基本不具有致突变性，它通过表观遗传学中的组蛋白修饰作用来发挥其生物效应，所以成为了我们本次研究的研究点。 主要结论 1.本次实验没有遵循统计学分析原理进行重复实验来验证实验结果，应重复三次来确定实验结果是否可信 2.进一步的实验可以针对选取特定的基因做启动子区域组蛋白修饰的研究。比如可以做跟五价钒生物效应有关的下游基因的H3K4me3和H3K9me2的进行组蛋白修饰水平的研究。探讨对于特定基因的转录表达作用。 一.研究背景 二.研究方法 三.结果 四.主要结论 五.实验讨论 矾酸盐应用广泛，可用作化学试剂、催化剂、催干剂、媒染剂，制造钒酸铵和偏钒酸钾,也用于医疗照相、植物接种及防蚀剂等，也可用于化肥、煤气脱硫、照相，也可用做媒染剂等。 钒酸盐中钒有二价，三价，五价态，其中80%为五价钒，人接触钒主要是通过呼吸系统吸入含钒粉尘，这也就是为什么我们采用人肺腺癌A549细胞进行研究。 钒也是人体一种必要的元素，最近研究表明钒具有类胰岛素作用，吸收葡萄糖到细胞，从而降低血糖，也是最近关于钒酸盐研究的热点之一。 钒还有通过AKT-通路保护心血管的作用。 研究背景 研究方法 1.细胞培养：人肺腺癌A549细胞在含有5%CO2 湿润的环境下培养。用带有10%的小牛血清和1%的抗生素（青霉素）的F-12 K培养液培养细胞。 2. 细胞处理：细胞在10,25,50和100μM下培养24小时。在RIPA缓冲液里处理10分钟，使细胞核破裂，使组蛋白暴露。 3.组蛋白提取：将沉淀刮下，离心。采用0.4mol硫酸进行提取。 4.用免疫蛋白印迹法测定五价钒酸盐对人肺腺癌A549细胞组蛋白修饰的影响。 H3K4me3 1.00 Coomassie 25 μM V 100 μM V 50 μM V 10 μM V 0 μM V 0.51 0.37 0.60 0.55 实验结果 H3K4me2 Coomassie 10 μM V 25 μM V 50 μM V 0 μM V 0 μM V 75 μM V 100 μM V 0.82 0.99 0.84 1 1 0.90 0.75 H3K9me2 1.00 Coomassie 25 μM V 0 μM V 10 μM V 50 μM V 100 μM V 1.09 2.04 2.06 1.67 AcH3K9 10 μM V 25 μM V 50 μM V 0 μM V 0 μM V 75 μM V 100 μM V Coomassie 0.77 0.92 0.52 1 0.89 0.74 0.54 10 μM V 25 μM V 50 μM V 0 μM V 0 μM V 75 μM V 100 μM V H3K20me3 Coomassie 0.99 1.09 0.85 1 1.25 1.66 10 μM V 25 μM V 50 μM V 0 μM V 0 μM V 75 μM V 100 μM V AcH3 Coomassie 1.03 1.19 0.84 1 1.04 0.84 0.68 H3K4me3位于基因启动子区域，它的修饰水平影响了转录激活的水平。实验数据得出，随着五价钒浓度的增加，其修饰水平下降，可以得出结论，五价钒具有抑制转录激活的作用。同样的， AcH3K9也是调控转录激活的修饰，其结果也表现为修饰水平下降，同样具有抑制转录激活的作用。 H3K9me2作用为抑制转录活动，结果表明随着五价钒浓度的增加，修饰水平显著增加，也可得出五价钒具有抑制转录激活的作用。同样的， H3K20me3也是调控转录抑制的修饰，其结果也表现为修饰水平增加，同样具有抑制转录激活的作用。 3.H3K4me2和AcH3的修饰变化比较小，可能不具备太大的讨论意义，在以后的重复实验中可以再进行讨论。 4.整体来说，不论这些特异的组蛋白修饰对转录起的作用是什么，结果都一致表明五价钒对人肺腺癌(A549)细胞的基因转录活动都具有抑制作用。 实验讨论