rhfgf8a效表达载体的构建及表达.pdf

摘要 Growth 成纤维细胞生长因子--8a(FibroblastFaetor-8a，FGFSa)是成 broblastGrowthFactorFami 纤维细胞生长因子家族(Fi ly，FGFs家族)的 第8个成员FGF8的a亚型，不仅是胚胎发育阶段必需的细胞调节因子，更有多 种生物学功能，能够高效安全地促进组织损伤的修复，还在神经于细胞培养过 程中起重要的营养和诱导作用，因此有广阔的临床应用前景。重组人FGF8a (recombinanthumanfibroblast growth 过体外改造克隆后以生物工程菌表达得到的多肽。具有与天然FGF8a一致的活 性。同时，与从天然动物组织中提取得FGf8a相比，更具有产量高、成本低， 资源丰富的优点。 本文所阐述的研究内容，是rbFGF8a瀑题的一个部分，是广州拜迪生物医 药有限公司与新西兰皇家科学院合作项目的子课题。主要目的是构建新的高效 表达rhFGfSa的载体，并选择合适的表达宿主对其进行表达，完成高教表达 rhFGF8a的上游工作。 本研究采用分子克隆技术、PCR扩增技术和DNA点突变技术，对rhFGF8a 多肽。并且比较了新构建的两种质粒与前期rhFGF8a课题研究所构建的rhFGF8a 原质粒在两种表达宿主中的表达量，发现经过基因改造后的rhFGF8a～pET22b 质粒和pET28a—rhFGF8a质粒在两种表达宿主中的表达量都大大高于未改造的 pET28a—rhFGF8a质粒已符合工业化生产的需要。 此外，本研究还就rhFGF8a表达工程菌的培养条件、诱导流程，分离纯化 和体外复性进行了初步的探索，为rhFGF8a课题的后续工作提供了参考数据并 具有指导意义。 关键词：rhFGF8a基因改造高效表达载体表达 Abstract Themember oftheFibroblastGrowth Factor Growth familiy,Fibroblast Factor．8， isoforma(FGF8a)isasacrucial accepted organizingsignal the duringdevelopment ofvertebrate FGF8aisalso embryos．Furthermore，theefficientin healingorganic theneural stemcellsandinduction neurons．Soitis wound，culmfing ofdoparninergic that the is for to suggestedpotentialapplicationhugeFGF8abenefitthecliniacal treatment． Our isa ofthe rhFGF8a is studypart project，which c