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HGF基因修饰BMSCs治疗 早期股骨头缺血性坏死的研究 博士研究生：温茜 指导教师：马骊 摘要 necrosisofthefemoral 股骨头缺血性坏死(avascular head，ANFH)是临床多 发病和常见病，致残率极高，多见于20．50岁青壮年，严重影响患者的生活质 量和劳动能力，给社会和家庭造成巨大负担。据世界卫生组织不完全统计，全 世界约有3000万人患有此病：我国患者约500．750万，每年新发病例15．20万， 发病率呈逐年上升趋势。ANFH目前尚无特效疗法，已成为世界医学界亟待攻 克的难题。寻找新的有效的早期治疗方法、保存自身股骨头显得尤为重要，其 潜在的社会和经济效益不言而喻。 不论何种病因引起的ANFH，其根本原因是存在骨内压升高_÷血供障碍这 一恶性循环。一般认为本病是一不可逆过程，因此，ANFH的治疗策略应该是 早期治疗，降低骨内压、改善股骨头血供，打破恶性循环，同时进行坏死区骨 质修复。利用血管生长因子诱导新血管生成和侧枝循环建立，是打破ANFH病 理恶性循环最有效的手段，这也为ANFH治疗提供了新的研究方向。 血管生长因子是一组可以诱导血管生成的细胞因子。不同的血管生成因子 具有不完全相同的生物学活性，因此，选择何种血管生长因子至关重要。肝细 factor,HGF)由间质细胞产生，具有很强的促血 胞生长因子(hepatocytegrowth 管内皮细胞(vascularendothelial cells，VECs)增殖和促血管生成作用，并可抑 摘 要 制细胞凋亡和减轻组织纤维化，已在治疗缺血性心脏病和肢体动脉闭塞等疾病 中展现出良好的应用前景，有望成为治疗ANFH理想的血管生长因子。 marrow stem 骨髓基质干细胞(bone cells，BMSCs)是一种由 mesenchymal 骨髓中分离获得的具有多种分化潜能的间质干细胞，是体内参与组织再生和修 复的重要干细胞成分之一，取材方便，易于被外源基因转染，同时还能分泌大 量的促细胞和血管生长因子，其成分中含有骨祖细胞，具有良好的向成骨细胞 分化的潜能。此外，BMSCs不具免疫原性，因此同种异体移植无免疫排斥反应， 被认为是骨组织工程近阶段最有希望应用于临床的种子细胞。目前，用BMSCs 治疗早期ANFH已显示出诱人的应用前景。 将基因治疗和干细胞移植治疗相结合，用HGF基因修饰BMSCs治疗 能力的同时分泌HGF，诱导新血管生成，改善股骨头血供；(2)HGF对BMSCs 有趋化作用，局部高分泌的HGF可使BMSCs“停留”在坏死区局部，利于其向 成骨细胞分化；(3)HGF能抑制BMSCs凋亡，其诱生的血管可改善移植细胞 的生存环境，提高BMSCs移植存活率，进而提高治疗效果。 本课题将基因治疗、干细胞移植、组织工程技术有机结合，以HGF为目的 基因、以BMSCs为靶细胞，借助AdMax腺病毒载体系统，将HGF基因转入 BMSCs；再以其为种子细胞，经髓芯减压隧道移植到股骨头坏死区，用于治疗 早期ANFH。在减压的同时，移植细胞分泌的HGF诱导局部新血管生成和侧枝 循环建立，改善股骨头血供：BMSCs在局部微环境诱导下向成骨细胞分化，修 复坏死区骨质，这种集减压、血管生成和骨质重建一体化的治疗技术，为ANFH 治疗提供了一种全新的模式。 目的 在体外探讨HGF调节BMSCs增殖与成骨分化活性的方式与机制的基础 上，评价HGF基因修饰BMSCs治疗早期激素性和创伤性ANFH的疗效，并初 Ⅱ 博士学位论文 步探讨发病与治疗的分子机理。 方法： 1、分离培养与鉴定兔BMSCs 取4．8周龄健康新西兰大白兔，麻醉后，于双侧髂后上棘行穿刺法抽吸骨 髓，抗凝处理后