kkay糖尿病鼠睾丸动脉平滑肌增生、肥大、凋亡的动态变化及hoco的调控.pdf

中文摘要 KKAy糖尿病小鼠睾丸动脉平滑肌 增生、肥大、凋亡的动态变化及HO／CO的调控 摘 要 对动脉硬化的研究基本证实，动脉硬化以早、中期内膜增生、中膜平 滑肌增殖、肥大和晚期平滑肌凋亡、硬化斑块脱落为特征，动脉管壁经历 了一个从细胞、组织增多及管壁增厚到细胞减少、管壁变薄的病理过程， 但其详细机制尚不完全清楚。以往对动脉硬化机制的研究注重于生长因子 及细胞外基质的改变，近年来，从HO／CO系入手探讨动脉硬化的发病及 防治机制已引起国内外学者的重视。血红素加氧酶(Heme Oxygenase，HO) 是哺乳动物组织细胞微粒体中的一种蛋白酶，可以催化血红素在体内降 monoxide 解，其降解产物一氧化碳(carbon co)对血管具重要的调节作用。 现发现HO有三种同工酶，其中HO．1属于诱生型，具有抗氧化应激性损 伤的作用。动脉硬化过程通过低氧诱导HO．1的意义是产生CO，CO通过 多种途径抑制平滑肌增生、肥大及凋亡，但糖尿病性动脉硬化时血管壁 HO-1是否增加说法不一，另一方面，CO抑制平滑肌增生、肥大及凋亡 的主要途径尚无定论：再者以往对动脉硬化的研究多集中于大动脉及心、 脑、肾血管【卜引，迄今未见有关糖尿病导致睾丸动脉形态结构变化的报道。 睾丸动脉走行于腹股沟管内，纤细壁薄，迂曲而行，皿中高糖高脂易存留 沉积，引起动脉硬化，必将影响睾丸血供，从而也影响到激素和生物活性 物质对生精功能的调节。鉴于此，本论文从整体、细胞和分子等不同水平， 系统研究了5w～21w的KKAy糖尿病小鼠的睾丸动脉硬化时平滑肌细胞 增殖、肥大及凋亡的动态变化及其HO／CO的可能调节机制。 一、KKAy糖尿病小鼠睾丸动脉平滑肌增生、肥大的变化 应用自然发病性糖尿病模型，观察睾丸动脉平滑肌增生、肥大的变化， 并应用基因芯片技术，观察动脉硬化早期平滑肌增生、肥大相关基因的改 变。实验动物分为KKAy糖尿病(diabetes 小鼠)。糖尿病组：选取5w，7w，9w，ll W’16w,21 W，30w的雄性KKAy 自发性糖尿病小鼠，分为7组，每组6只。对照组：选取相应年龄段雄 性C57BL小鼠，分为6组，每组6只。应用组织化学、免疫组织化学、 中文摘要 透射电镜、血管铸型扫描电镜及流式细胞分析等检测BrdU掺入率、细胞 增殖周期及超微结构的改变。 一步法提取睾丸动脉的总DNA，Oligodt纤维素抽提和纯化mRNA， 对照组和糖尿病组的mRNA在逆转录时分别应用Cy3干llcy5荧光素标记。 将标记了荧光素的eDNA与细胞周期相关基因表达谱芯片杂交，扫描并 分析杂交结果。 cy5／cy3 值0．5表明DM组该基因下调。 结果：1半薄切片的甲苯胺蓝染色：与对照组相比，DM组内膜、中 弹性膜增厚且多层化。 2 16w组明显。 3细胞增殖的免疫组化及流式细胞检测： 3．1睾丸动脉BrdU掺入率变化：对照组整个观察过程睾丸动脉管壁内阳 性细胞较少。DM组则动脉管壁三层膜内均可见到阳性细胞，尤其中膜阳 性细胞较明显。阳性细胞数在9w组明显增多，11W组阳性细胞达高峰， 16w开始减少。 3．2流式细胞显示睾丸动脉细胞增殖的变化：S期与G2、M期为增殖期细 胞。对照组全程增殖水平均很低，而DM组在5w、7w、9w、llw较对照组 与21w、30w有显著性差异。 4超微结构的观察 4．1 TEM观察DM组5w组睾丸动脉未见异常；7w组睾丸动脉仅见内膜 W、11 轻度增厚，内弹性膜增厚较明显；9 W及16w组内膜增厚，内皮可 以不规则，内皮下层的细胞间质成分增加，尤以胶原纤维增加明显，内弹 性膜的不同部位变化各异，厚薄不均、多层化、重者断裂，中膜平滑肌且 常突破内弹性膜进入内皮下层或位于多层化的内弹性膜之间，多层化的 内弹性膜也可侵入至中膜平滑肌