lamp检测法于日本血吸虫病早期诊断诊疗效考核的研究.pdfVIP

LAMP检测法用于I】本IfIL吸虫_Ilii早期诊断及疗效考核的研究 中文摘要 中文摘要 研究表明核酸检测法用于日本血吸虫感染家兔血清特异性DNA的检测具有早 期诊断和疗效考核价值。本研究成功建立了具有高度敏感性和特异性的LAMP法， 并在前期中、高感染度动物模型的研究基础上，进一步探讨LAMP检测法对日本 血吸虫低感染度家兔模型早期诊断和疗效考核的价值，并对LAMP体系进行了优 化，同时评价了本课题组所建立的3种核酸检测法应用于同本血吸虫病患者的诊 断及疗效考核效果。全文共分为五个部分： 第一部分LAMP法反应体系的建立及对日本血吸虫感染家兔血 清DNA的检测 在已建立的两种PCR法核酸检测技术的基础上，本研究进一步建立了一种新 型快速、灵敏的核酸检测法，即环介导的恒温扩增法(简称LAMP法)，并与两种 未见与曼氏血吸虫、华支睾吸虫和旋毛虫的交叉反应。在日本血吸虫中高度感染 家兔模型的早期诊断和疗效考核的实验中，LAMP法同样可从感染后第3d的血清 中检测出阳性结果，对疗效考核的评价表明LAMP法在治疗后第17w时即转为阴 敏感性。 第二部分LAMP检测法反应体系及反应条件的优化 对LAMP反应体系的优化结果表明，LAMP反应体系最佳内引物浓度为 Green I染料，观察其 价比较好的酚氯仿萃取法。向LAMP扩增产物中加入SYBR 颜色改变来判断扩增结果较在反应体系中加入荧光染料，通过观察荧光反应来判 断扩增结果更为准确。 中文摘要LAMP检测法用于【]奉J『II吸虫病早期诊断及疗效考核的研究 第三部分LAMP检测法对低感染度日本血吸虫病早期诊断及疗 效考核效果的评价 在前期中度感染动物模型实验研究取得良好效果的基础上，建立了四组更加 符合现场病人实际状况的低感染度动物模型，进一步评价核酸检测法特别是LAMP 法的实际应用价值。结果显示三种核酸检测法均可从四种不同低感染度家兔模型 感染后3d及1w-7w的外周血清中扩增到同本血吸虫特异性DNA片段，尤其是可 从感染30条血吸虫尾蚴的家兔外周血清检测出特异性DNA片段，其EPG仅为14。 对四种不同低感染度同本血吸虫病家兔模型疗效考核的结果表明，LAMP法对感 转阴。对感染50条和30条R本血吸虫尾蚴的家兔血清的检测结果则显示，LAMP 的效果与感染度相关，即感染度越重，血清中血吸虫DNA转阴所需时间越长。且 判断阳性结果，具有潜在的现场应用前景。 第四部分LAMP检测法在日本血吸虫病患者诊断及疗效考核中的 应用 对110例粪检阳性的慢性病人血清DNA的检测结果表明，LAMP法的阳性率为 为93．2％，91．6％和91．3％。对47例治疗后三个月、六个月和九个月病人血清的检测 结果显示，三种核酸检测法的阴转率均随治疗后时间的延长而增加。LAMP法的阴 ll LAMP检测法用于|】本m吸虫病早期诊断及疗效考核的研究 中文摘要 和31．9％，三种核酸检测法和两种免疫学诊断法对治疗后九个月病人血清的阴转率 存在显著差异，P0．05。 第五部分LAMP检测法对不同感染度日本血吸虫病患者的诊断及 疗效考核价值 对110例慢性病人血清和47例治疗后病人血清按照EPG水平进行分类，进一 步评价LAMP检测法对同本血吸虫病患者的诊断及疗效考核价值。检测结果显示， LAMP法对高感染度病人血清的阳性检出率为100％(4／4)，对中感染度的阳性检出 3／1 nested．PCR法则分别为100％(4／4)，100％(1 种免疫学检测法的阳性检出率均与感染度相关。LAMP法对47例高、中、低感染 度病人血清治疗后九个月的阴转率分别为100％，100％和79．5％，普通PCR法分 0％～33．3％之问，与核酸检测法的阴转率存在显著差异，P0．05。 别为0．604和O．735。但由于其操作简便、反应快速、结果直观、成本低廉，无需 昂贵仪器，仅需_．口水浴锅即可完成扩增