md28对肠上细胞胆固醇转运及abcg5abcg8表达的影响.pdfVIP

硕士研究生：宋砚明 导 师： 王佐教授 中文摘要 目的：探讨MD28对载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠以及Caco一2细胞胆固醇 转运相关基因的表达影响，阐明MD28的抗动脉粥样硬化作用机制。 组各12只：①普食组(正常饲料喂养，PBSO．1mY2d，腹腔注射)②高脂高胆固 醇组(高脂高胆固醇饲料喂养，PBSO．1mY2d，腹腔注射)③高脂高胆固醇+MD28 组(高脂高胆固醇饲料喂养，MD280．1ml／2d，腹腔注射)④普食+MD28组(正常饲 料喂养，MD280．1ml／2d，腹腔注射)，其中的高脂饲料为正常饲料加2％胆固醇 和10％猪油。 12周后，所有小鼠经20％乌拉坦0．2～O．3ml腹腔麻醉，摘除眼 固醇(totalcholesterol，TC)、高密度脂蛋白胆固醇(1lighdensity lipoprotein cholesterol，HDL．C)和低密度脂蛋白胆固醇(10wdensity cholesterol， lipoprotein LDL．C)含量。苏丹Ⅳ染色检测主动脉内膜面动脉粥样硬化病变。石蜡切片HE 染色检测apoE乒小鼠主动脉根部横切面动脉粥样硬化病变。冰冻切片油红O染 色检测主动脉窦脂质沉积。生物信息学分析ABCG5和ABCG8的组织表达与亚 Western Blot分别检测小鼠小肠组织中ABCG5和ABCG8mRNA和蛋白表达。 素处理后，高效液相色谱法测量细胞内胆固醇和胆固醇酯含量，油红O染色观 察细胞内的脂滴，RT-PCR和Western mRNA和蛋白表达。 相应的低于高脂高胆固醇组和普食组，而且存在显著性的差异(pC0．05)。高脂 高胆固醇+MD28组与高脂高胆固醇组以及普食+MD28组与普食组之间进行相应的 对比显示，小鼠全主动脉粥样硬化病变面积、主动脉窦斑块以及脂质沉积都是前 者相应的低于后者，且存在显著差异性(p0．05)。生物信息学表明着两个基因 在肝脏和小肠的质膜上高表达。在载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠以及Caco-2细 胞中，组织免疫荧光，RT—PCR以及WesternBlot法发现高脂高胆固醇+MD28组和 普食+MD28组ABCG5和ABCG8mRNA以及蛋白的表达都相应的高于高脂高胆固醇 胞油红O染色显示加MD28处理组的脂质沉积均相应的低于没有加MD28处理的 组。 结论： ①MD28能够减轻载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变； ②MD28能够上调载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠中三磷酸腺：薛结合盒转运子 G5和G8的表达； ③MD28能够上调人结肠腺癌细胞(Caco一2)中三磷酸腺：舒结合盒转运子G5 和G8的表达，促进细胞内胆固醇的排出。 关键词：MD28；载脂蛋白E基因敲除小鼠；Caco．2细胞；三磷酸腺苷结 合盒转运子G5；三磷酸腺苷结合盒转运子G8；胆固醇转运 EffectsofMomordicin-28onCholesterol and Transport ofABCG5andABCG8in Expression Intestinal cell epithelial ABSTRACT To theeffectsofmomordicin一28on ofintestinal OBJECTIVE expression explore cholesterolrelated of andcaco一2 thatwecan tr