hdl及其亚型化修饰后对人脐静脉内皮细胞损伤及组织因子途径抑制物-1表达的影响.pdf

HDL及其亚型氧化修饰后对人脐静脉内皮细胞损伤及 组织因子途径抑制物一1表达的影响 研究生：彭湘萍 导师：姜志胜教授 专业：病理学与病理生理学 中文摘要 ． 目的：观察HDL及其亚型氧化修饰后对人脐静脉内皮细胞的损伤作用和对组织 因子途径抑制物．1(TFPI．1)表达的影响并初步探讨其机制。 方法： umbilicalveinendothelialcells，HUVECs) 实验1．人脐静脉内皮细胞(human 分别与300mg／L 33258荧光染色观察HUVECs细胞形态和核形态的变化，用四甲基偶氮唑蓝 Tetrazolium (3．(4，5-Dimethylthiazol·2y1)．2，5．DiphenylBromide，MTT)比色法检测 细胞存活状况。实验分为7组：①空白对照组：含10％胎牛血清RPMI．1640培养基； HDL2孵育细胞 ②HDL组：用300mg／LHDL孵育细胞24h；③HDL2组：用300mg／L 24h；@HDL3组：用300mg／L oxHDL HDL3孵育细胞24h；(重)oxHDL组：用300mg／L oxHDL2孵育细胞24h；OoxHDL3组：用 孵育细胞24h；(查)oxHDL2组：用300mg／L 300mg／LoxHDL3孵育细胞24h。 transcription Blot检测细胞TFPI·lmRNA及蛋白质 ch血reaction，RT-PCR)，Western polymerase 孵育细胞24 孵育细胞24 细胞24 细胞24 24 4 24h。 实验3．LOX．1单克隆抗体(LOX．1 RT-PCR与WesternBlot检测细胞TFPI．1mRNA及蛋白质表达的变化情况。实验 分为5组：①空白对照组：含10％胎牛血清RPMI．1640培养基孵育；②HDL， mg／L)孵育细 HDL2，HDL3组：分别加入HDL(40rag／L)，HDL2(80meCL)，HDL3(40 胞24h；⑨oxHDL，oxHDL2，oxHDL3组：分别加入oxHDL(40mg／L)，oxHDL2(80 rag／L)，oxHDL3(40mg／L)孵育细胞24h；④LOX-1 LOX·1 组：10u mAb孵育HUVECs 2h后再分别加入oxHDL(40 g／ml mg／L)， oxHDL2(80mg／L)，oxHDL3(40 lamol／LBAYl l一7085孵育HUVECs2h后再分别加入 oxHDL2，oxHDL3组：40 oxHDL(40mg／L)，oxHDL2(80mg／L)，oxHDL3(40mg／L)孵育24h。 细胞24小时后，普通光学显微镜下观察发现，细胞数目减少，圆形细胞明显增 多，细胞间隙增宽，细胞边界不清，部分脱落。Hoechst33258染色后，荧光显 微镜下观察发现有大量的细胞核浓缩呈高亮度蓝色荧光的凋亡细胞；MTT结果 能抑制人脐静脉内皮细胞TFPI．1