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hGM．csF基因活体电转染救治小鼠放射损伤的实验研究 中文摘要 中文摘要 Colony stimulating f．actor，GM．CSF)具有刺激造血干细胞和祖细胞向髓系分化、增殖和成 熟的功能，在急性放射损伤救治中已经成为一种较为有效的细胞因子药物。但由 于细胞因子具有生物半衰期短、副作用大、用量不易控制等缺点，在一定程度上 限制了GM．CSF所能发挥的治疗作用。本实验利用活体基因电转导技术，将 hGM．CSF基因转入小鼠体内，探索一种新的转基因救治放射损伤的技术。 材料与方法：采用PCR方法将目的基因从原核载体中扩增出来，并通过修改 基因两端限制性酶切位点，将目的基因插入真核表达载体pEGFP-N1中，构建真 局部肌纤维细胞，使其有效持续表达hGM．CSF蛋白。转基因组与单纯照射组小鼠 应用丫射线与中子线照射，观察小鼠急性放射损伤的死亡率、血细胞数目、骨髓 细胞以及胸腺、脾脏淋巴细胞增值率和凋亡率，肝脏、肾脏以及睾丸的病理变化， 探讨hGM．CSF活体转基因在救治急性放射损伤中的作用。 cDNA序列 结果： 经测序表明，构建的真核表达质粒pEGFP-N1一hGM．CSF 与GeneBalll【序列一致。 活体基因电转导效率明显增高。在急性丫射线损伤中， hGM．CSF转基因组小鼠较单纯照射组小鼠死亡数量明显减少，白细胞总数均显著 高于对照组(pO．05)，至照后28d时，白细胞已恢复至照射前水平；骨髓细胞增 殖率亦显著高于对照组(pO．05)，且一直处在一个相对较高的水平，约为对照组 的80％一95％。转基因组小鼠肝脏和肾脏病理结果显示，组织充血、水肿、坏死程 度均较单纯照射组轻微，恢复时间缩短。在急性中子射线损伤中，hGM．CSF转基 因组小鼠与单纯照射组小鼠比较，死亡率明显降低；白细胞总数下降程度亦明显 减轻(pO．05)；骨髓细胞、脾脏和胸腺淋巴细胞凋亡率均降低(pO．05)。 结论： 转染的有效载体，具有较高的转染效率。 2．hGM．CSF活体基因电转染在小鼠急性丫射线损伤中可降低小鼠死亡率，减 轻白细胞下降程度，提高骨髓细胞增殖活性，缩短肝肾组织病理损伤恢复时间， hGM．CSF基因活体电转染救治小鼠放射损伤的实验研究 中文摘要 减轻病理损伤程度。 3．hGM．CSF活体基因电转染在小鼠急性中子射线损伤中可明显降低小鼠死 亡率，显著降低骨髓细胞与脾脏、胸腺淋巴细胞凋亡率，对减轻白细胞下降有明 显疗效。 4．hGM．CSF基因活体电转染为救治急性重度放射损伤提供了新的有效手段。 关键词：hGM．CSF；基因治疗；活体；电转染；辐射损伤 作 者：王天昶 指导教师：杨占山教授 II hGM．CSF基因活体电转染救治小鼠放射损伤的实验研究 英文摘要 The ofhGM—CSF inViVo inVestigation genetransferby the to radiation mice electroporationremedy inju哆of Abstract object：G衲nulocyte·MacrophageColonyStimulatillg