atm-chk信号通路对杂色曲霉素诱导人胃黏膜上皮细胞g2期阻滞的相关因子影响的研究.pdf

中文 英文 研究 综述 致谢 个人 中文摘要 ATM-Chk2信号通路对杂色曲霉素诱导人胃黏膜 上皮细胞G2期阻滞的相关因子影响的研究 摘 要 曲霉菌属真菌所产生的一种真菌毒素，广泛存在于自然界，是人类食品和 动物饲料中最常见的污染物之一。ST具有致癌性，可诱发多种组织癌变。 本实验室前期研究发现，ST可诱导体外培养的人胚胃黏膜细胞发生恶性 转化，并且可以诱导体外培养人胃黏膜上皮细胞GES．1发生G：期阻滞。 研究初步揭示了杂色曲霉素对人胃粘膜的可能致癌作用。 1复 合物的活性从而使细胞发生G2期阻滞。已证实在赭曲霉毒素A (Ochratoxin 否发挥作用却未见报道。 有鉴于此，在前期工作的基础上，我们采用蛋白免疫印迹和免疫共沉 通路和G2期阻滞相关因子的影响，分析两者的相互关系，以期揭示 ATM．Chk2信号通路对杂色曲霉素诱导人胃黏膜上皮细胞G2期阻滞的相 关因子的可能影响。 方法： l选择对数生长期的细胞随机分为溶剂对照组、0．075州、o．3}xM、 ST处理组，继续培养48h收集细胞进行相关指标 1．5州、3“M和6“M 检测。另选择对数生长期的细胞随机分为正常对照组、12h、24h、48h、 72h和96h ST处理组，各ST处理组的剂量均为3州，继续培养分别于 相应时间收集细胞。2采用蛋白免疫印迹技术，分别检测不同浓度、不同 中文摘要 测ST处理对细胞Cdc2．CyclinBl复合物的影响。 结果： 1ST对GES-1细胞ATM．Chk2信号通路的影响 Western Blot结果显示，与溶剂对照组相比，0．075州、O．3 gM、1．5 gM、3 在O．075 pM--一6 (，-=0．826，P0．01)。 正相关(厂=O．675，PO．0 1)。 综上结果表明，在上述剂量和处理时间内，ST可以剂量、时间依赖 性地引起ATM．Chl(2信号通路的激活。 2ST对GES．1细胞G2期阻滞相关因子的影响 Western Blot结果表明，与溶剂对照组相比，O．3 gM、1．5脚、3州 和6gM 1．5gM--6gM 处理可以升高p-Cdc2(P0．05)。与此同时，较高剂量ST处理组(31．tM和 6“MST处理组)CyclinBl的表达水平明显增高(尸O．05)。 ST处理 免疫共沉淀结果表明，与溶剂对照组相比，O．075}tM--6gM 达水平与ST的剂量成负相关(，=．0．977,P0．or)。 ST处理组Cdc25C的 与正常对照组相比，12h、24h、48h、72h、96h 蛋白表达水平明显降低(PO．05)，而24h--一96hST处理组p-Cdc25C明显 ST处理组Cdc2的表达水平显著降低，并 升高(尸O．05)。同时，12h-96h 2 中文摘要 且在此时间范围内Cdc2的水平与ST处理时间成负相关 (，．一0．889，P0．01)，而经24h-96hST处理后p-Cdc2的水平明显升高 常对照组伊O．05)。 以上结果提示，ST处理可以显著影响G2期阻滞相关因子的表达，主 达升高，同时还可以剂量