pbmcs中hv逆转录酶表达与临床乙型肝炎的关系.pdf

PBMCs中HBV逆转录酶表达与临床乙型肝炎的关系 PBMCs中HBV逆转录酶表达与临床乙型肝炎的关系 中 文摘要 青岛大学医学院99级病原生物学专业 硕士研究生 周蓉蓉 导 师 王斌教授 目的：探讨乙型肝炎病毒(HBV)逆转录酶在外周血单个核细胞(PBMCs) 中的表达与乙型病毒性肝炎临床的关系。方法： 选择70例乙型病毒性肝炎病 人，其中急性肝炎19例，慢性肝炎轻度12例，中度13例，慢性肝炎重度11例， 肝炎肝硬化15例。另外有10例HBsAg阴性的健康人作为对照。分别提取其 逆转录合成cDNA。以HBV P基因区设计合成逆转录酶引物进行PCR扩增，以 检测HBV逆转录酶的表达情况。并对1例阳性标本进行了克隆和测序，即将从 阳性标本中获得的379bp的扩增片段纯化后与T—Easy载体连接，转化于大肠杆 菌DH5 n中，通过蓝白斑选择及酶切鉴定筛选出阳性克隆，提取重组质粒进行 序列测定。将所得序列通过Intemet与GenBank数据库中已知核苷酸序列进行同