pgm-neu和pgm-neu2载体的构建与鉴定.pdfVIP

pGM．neul和pGM—neu2载体的构建与鉴定 摘 要 肽表位p106．1 片段)，为进一步构建肺癌核酸疫苗及后续研究奠定实验基础。方法：1．小 U／ml， 鼠Lewis肺腺癌细胞株的培养：在含10o／60胎牛血清及双抗(青霉素100 链霉素100 的小鼠Lewis肺腺癌细胞制成细胞爬片，SP免疫细胞化学染色，光学显微 ％琼脂糖凝胶电泳检测。4．PCR产物的回收纯化：用琼脂糖凝胶DNA回 DNA连接酶的作用下进行连 载体的构建：目的片段与pGM．T载体在T4 接产物分别转化到DH5ct感受态菌，通过蓝白筛选挑选重组质粒。8．重组 阳性克隆的PCR鉴定：挑选平板上的白色菌落(阳性重组子)作为模板，分 PCR鉴定的阳性菌落，用质粒小提试剂盒提取及纯化阳性重组子。10．DNA l 小鼠Lewis肺腺癌细胞有明显深棕色，表现出较强阳性，阳性信号位于细