哺乳动物细胞培养中的生活和死亡现象抑制程序性死亡的策略.docVIP

/bbs/index.php 另外可以下载一个Adobe Illustrator的绘图软件和相关教程 学习使用 哺乳动物细胞培养中的生活和死亡现象：抑制程序性死亡的策略 动物细胞培养广泛用于生产有价值的生物治疗药物，这些药物包括单克隆抗体，疫苗和生长因子。工业细胞系，比如CHO、NSO、BHK、HEK-293保留了程序性死亡级联反应中的一些分子成分。因此，一旦这些细胞暴露在生物反应器的刺激下，它们会经历程序性死亡的过程。补充控制程序性死亡和提高培养的产量的方法是生物工程专家一个主要目标。幸运的是，以前的研究已经发现一些牵扯到激活和抑制程序性死亡的胞内蛋白。这里我们总结了在生物工程应用中，三个程序性死亡的途径，并讨论了不同的补充限制细胞死亡的环境和基因方面的方法。 优化动物细胞培养技术是经济化生产象单克隆抗体、生物治疗药物和疫苗药物必须的。生物反应器培养面临的一个主要问题是细胞的死亡，因为细胞死亡降低了整体的生物药物的产率。细胞在生物反应器中的死亡是有不同的原因，包括机械搅拌、营养的消耗、有害副产物的积累、氧气的消耗和病毒的侵染。细胞以两种形式死亡：坏死和程序性死亡。坏死是由突然地处于极端的环境引起的，极端环境能剧烈地破坏细胞，使它们膨胀直至破裂，将胞内物释放到周围的环境中。然而，程序性细胞死亡是由非致命的刺激因子激活了细胞内一连串的反应直到细胞死亡的有规律的生理反应。为了优化在细胞培养过程中细胞的生命力和蛋白质的产率，我们花精力研究控制细胞死亡的方法。本综述在简单浏览细胞程序性死亡途径后，总结了在生物工程中用来限制细胞死亡的新方法。 细胞的程序性死亡 程序性死亡是个基因控制的过程，可以通过形态上的细胞和染色质的萎缩、质膜的起泡来识别。起泡涉及到膜碎片从细胞上以凋亡小体的形式脱落，脱落小体包括细胞质和细胞核成分。我们比较了经过acridine orange和溴红染色的正在经历程序性死亡中国仓鼠卵巢细胞和野生型的中国仓鼠卵巢细胞发现：程序性死亡的细胞表现出细胞膜起泡和细胞核萎缩的现象（图一）。这些程序性死亡小体能被吞噬在活体内，尽管，在细胞培养过程中，它们在活体内要么分开，要么聚集。了解细胞程序性死亡的分子机制和控制它因素可以用来抑制细胞死亡和改善生物反应器的情况（performance）。 图一.被橘黄和溴红染色的健康和程序性死亡的中国仓鼠卵巢细胞。上面一幅图是健康的中国仓鼠卵巢细胞，在形态上，它呈现出细胞膜完整的球状体。下面一幅图呈现是暴露于刺激后正经历程序性死亡的中国仓鼠卵巢细胞，它的细胞膜不再完整，而是呈现出脱落的程序性死亡小体，膜碎片从细胞上脱落的活动就是起泡。 尽管细胞的程序性死亡过程是很复杂，并且细胞内的事件牵扯到一些由于外部刺激信号或内部具体器官始发事件（initiation event）导致的一些信号级联反应的激活，但是三个主要的途径占优势：（i）线粒体介导的途径（ii）内质网刺激诱导途径和（iii）细胞表面信号转导途径（图二）。一些有关程序性死亡的信号聚集在线粒体——细胞能量产生器，也许不是巧合，它也容纳许多激发程序性死亡的分子，包括细胞色素C、第二级联线粒体激活剂（SMAC)/DIABLO和程序性死亡诱导因子（AIF)。维持线粒体膜电位是阻止激活程序性死亡途径的必须控制点。Bcl-2蛋白质家族是在线粒体膜和细胞膜外侧控制程序性死亡级联反应主要成员。Bcl-2家族由前程序性死亡成员和抗程序性死亡成员组成，这些成员分成三类家族：（i）抗程序性死亡的同源族，包括BH域1,2,3和4；（ii）前程序性死亡成员，包括BH1,2,3域；和（iii）只有BH3前程序性死亡成员（图三）。一旦前程序性死亡蛋白如BAX和BAK暴露在内部或外部死亡信号中，它们发生了结构的修饰，这种修饰改变了线粒体膜的完整性，导致细胞色素C和其他的前程序性死亡分子的释放。这些分子是受程序性死亡刺激的应答产生的，这些刺激包括接触毒素或者促进pro-caspase-9激活的DNA损伤，pro-caspase-9是和起始细胞内程序性死亡有关的cysteine-asparate蛋白酶。Caspase-9和其他的caspase存在于可以通过蛋白酶酶解的无活性的酶原（）。在细胞色素C和能量存在的情况下，Caspase-9的活化发生在凋亡小体内，并牵扯到凋亡蛋白激活因子和pro-caspase-9. 抗程序性死亡蛋白包括Bcl-2和Bcl-xl是和上面这些前程序性死亡信号的功能相反，它们通过以下不同的分子机制阻止前程序性死亡分子从线粒体中释放：维持线粒体膜的完整性和结合前程序性死亡bcl-2家族成员。代谢产物能通过电压依赖性阴离子通道渗过线粒体膜，这个过程好像是被bcl-2家族里的蛋白质控制的。 内质网刺激诱导程序性死亡途径是在不同的情景下发现的，这些情景包括抑