克鲁维酵母ar序列结构与功能的研究.pdf

克鲁维酵母ARS序列结构与功能研究 中文摘要 克鲁维酵母ARS序列结构与功能研究 目的：通过构建酵母ARS随机突变体库，从中筛选出具有较强的转 化效率的ARS序列，用以构建新型高效的克鲁维酵母基因工程载体。 方法：针对已知ARS序列设计引物，用含有已知ARS序列的质粒 为模板，进行突变PCR反应，得到ARS随机突变体库。将整个突 变体库与酵母的穿梭质粒载体连接，转化大肠杆菌E．coliDH5ct进行 扩增。抽提大肠杆菌转化子质粒并用限制性内切酶初步鉴定重组质 粒。将重组质粒转化宿主克鲁维酵母菌HKY039。同时以不含突变 ARS的载体质粒作为对照，比较转化效率。挑取转化效率明显提高 的酵母转化子，再抽提酵母菌质粒并转化大肠杆菌。抽提大肠杆菌 转化子质粒进行DNA序歹0测定。把经测序证实有突变的质粒再转化 克鲁维酵母菌以进一步验证ARS序列突变与转化效率提高之间的相 关性。 结果：成功地构建出适用于筛选ARS序列的随机突变体库，并从中 筛选出了具有较强转化效率的新ARS序列，进而成功地构建了新型 高效的克鲁维酵母转化载体。 结论：1．首次成功地构建了适用予筛选克鲁维酵母ARS序列的随机 突变体库；2．首次利用突变PCR方法成功