成人视网膜假定白基因arhp的克隆和鼻咽癌相关肽基因nap1的克隆及功能的初步研究.pdf

摘要 鼻咽癌(nasopharyngeal 区常见的肿瘤之一。流行病学调查显示，鼻咽癌的发生涉及到遗传倾 向性和环境致癌因素，很可能是遗传易感性个体，接受了致癌物的作 用而发生的。EB病毒OiBV)、化学致癌物和胚性击中(即遗传因素 或自发突变)构成NPC的主要病因，而发病阶段至少在二个以上。 各种环境因素、饮食因素、EBV感染及遗传因素导致ras、myc等瘤 基因过表达及p53、p16等抑瘤基因突变和／或表达改变，经过癌前病 变，最终发生鼻咽癌。但迄今为止，鼻咽癌的具体发病机制仍尚未完 全阐明。因此，鼻咽癌相关基因的克隆与功能研究，对阐明鼻咽癌的 发病机制、探讨有效的针对鼻咽癌的防治措施都有着重要的理论和实 践意义。 鼻咽癌致病基因的克隆策略主要包括：1．连锁与相关分析；2．从 杂合性丢失(10ss 3．表型克隆；4．定位候选克隆等。随着人类基因组计划(Human Genome Project，HGP)的实施，某些与鼻咽癌相关的染色体区域的 大规模测序已经完成，这为鼻咽癌致病基因克隆提供了良好的条件。 本研究以Homo．sapiens 表新基因的未知序列。结合鼻咽癌常见的染色体缺失和扩增部位，从 中选择4个可能与鼻咽癌相关的UniGene簇的EST序列。它们分别 BG231174两个EST在鼻咽癌活检组织与其对侧相应部位的正常鼻咽 胞株中表达，其余均无表达，BG231197在鼻咽癌活检组织与其对侧 相应部位的正常鼻咽组织之间存在表达差异。从上述BG222624和 癌相关基因NAPI，并对其功能进行了初步研究。本研究分三部分， 其主要实验方法及实验结果如下： 第一部分：ARHP基因的分子克隆、序列分析及其表达特征 6991 子延伸产物EST重叠群(1bp)，经与人类基因组草图进行序列 校正，获得了全长为1672 finder bp的eDNA序列。利用NCBI的ORF 服务器，分析发现该序列具有完整的阅读框架。以人胎脑eDNA文库 为模板，进行PCR扩增，测序结果与利用NCBI的ORFfinder服务 器分析结果一致，从而确定了基因的全长eDNA序列。用d。32P．dCTP 标记BG222624所代表基因片段，与含15种正常成人组织的多组织 Northern印迹膜杂交。结果表明，该基因在大脑中高表达，转录本大 II 小约为1．7kb，与生物信息学分析获得的基因全长cDNA大小一致。 672 该基因cDNA序列全长为l bp，命名为成人视网膜假定蛋白 retina 基因(adulthypothetical 580 163 预测分子量为46 Dalton。ARHP基因组跨越35 bp，含4个外 Blast软件的分析结果表明，ARHP基因编码的蛋白质与一种成年小 island。蛋白 蛋白质无明显同源性。在基因的5’非翻译区有2个CpG 质的理论pI为4．2l，为一种酸性蛋白质。预测该蛋白质有5个亲水 区和1个疏水区。生物信息学NeuralNetworks分析表明，该蛋白可 能为一参与转录调控的核蛋白，具有多个磷酸化、糖基化、肉豆蔻酰 基化和1个酰胺化等功能位点。 我们采用差异RT-PCR对ARHP基因的表达特征进行了进一步 研究，结果显示，ARHP基因仅在1例鼻咽癌活检组织和5．8F细胞 株中表达，在其余39例正常鼻咽组织、鼻咽癌活检组织及3种鼻咽 癌细胞株中均无表达。在淋巴结、扁桃体、肝、肝癌、胃、胃癌、胎 心、回肠、肾、直肠、直肠癌、腮腺、脾脏、子宫、扁桃体癌、喉癌、 T细胞淋巴瘤、下咽癌、会厌癌、舌根淋巴瘤、鼻咽乳头状瘤、硬 腭鳞癌、鼻咽粘膜慢性炎症和声带粘膜慢性炎症等活检组织中也都不