大鼠机械性脑损蛋白质表达谱的变化及意义.pdf

中文 摘 要 大鼠机械性脑损伤蛋白质表达谱的变化及意义 摘 要 目的:研究闭合性颅脑损伤大鼠血清和海马蛋白质表达 谱，探寻脑损伤生物标志蛋白。 方法:选雄性SD大鼠随机分为手术对照组及损伤后4 h,8h,12h,24h和48h组，复制Marmarous落体打击大 鼠脑损伤模型。分别进行神经行为学评价、常规HE染色、 尼氏染色和酷化银染色;并用弱阳离子交换芯片 (WCX2) 和金属亲和吸附芯片 (IMAC3)结合表面增强激光解析电离 飞行时间质谱技术分析大鼠闭合性脑损伤后不同时问血清 和海马中蛋白质表达谱的改变。 结果:I，临床表现:损伤组大鼠于打击后有84只大鼠 (70%)出现抽搐同时有呼吸暂停，持续约 15s;在没有出 现抽搐的大鼠中有11只大鼠(9.17%)出现惊厥，持续约30s; 17只大鼠(14.3%)伤后有肢体活动受限，表现为单肢或单侧 肢体活动受限。12只大鼠(10%)于打击后出现持续呼吸抑 制和全身抽搐，几十秒钟后呼吸停止，死亡。 2.神经行为学评价:大鼠脑损伤后平衡能力、翻身、支头、 行走、逃避和四肢功能均较损伤前有所减弱，评分降低。脑 损伤后1h,12h大鼠行为学评分与损伤前相比有显著性差 异 (P0.01)，损伤后24h,48h与损伤前比较无显著性差 异。 3.大体病理:损伤组大鼠可见蛛网膜下腔出血，分布广泛， 无明显大面积挫伤或局灶性挫裂伤;切面可见联肌体点状出 中文 摘 要 血及双侧脑室出血。 4.光镜下观察:损伤组大鼠HE染色主要表现为额叶、顶叶、 枕叶、小脑及脑干蛛网膜下腔出血，侧脑室出血，小挫伤灶。 部分神经细胞胞体浓缩，胞核固缩，胞浆内尼氏小体消失呈 同质性嗜酸性着色 (红色神经细胞);部分神经细胞胞体肿 胀，胞浆不规则淡染，核肿大淡染或消失。脑组织水肿，表现 为脑组织疏松、神经细胞及血管周围间隙增大，脑干部分神经 纤维增粗、呈波浪状改变。各损伤组海马区可见不同程度损 伤，损伤后8h达到高峰。HE染色中所见的红色神经细胞，焦 油紫染色呈深紫色;HE染色胞体肿胀，尼氏小体减少或消 失的细胞，焦油紫染色整个细胞呈淡紫色。酷化银染色阳性 神经细胞及神经纤维呈黑色，树突常呈波浪状改变。阳性细 胞常呈灶状分布，与HE染色中红色神经细胞的分布基本一 致。 5.蛋白质芯片结果:(1)WCX-2芯片共获得436个血清蛋 白质峰;IMAC-Cu芯片共获得229个血清蛋白质峰。WCX-2 芯片共获得364个海马蛋白质峰;IMAC-Cu芯片共获得345 个海马蛋白质峰。在6个组中，WCX-2芯片所捕获的血清蛋 白质数平均较IMAC-Cu芯片所获得的高出90.4%;WCX-2 芯片所捕获的海马蛋白质数平均较 IMAC-Cu芯片所获得的 高出5.5%。此外，IMAC-Cu芯片上捕获的血清蛋白质总数 中，43个 (18.8%)的蛋白质峰也出现在WCX-2芯片上; IMAC-Cu芯片上捕获的海马蛋白质总数中，24个 (7.0%) 的蛋白质峰也出现在WCX-2芯片上。WCX-2芯片在血清和 海马中都能捕获的蛋白质数是25个;IMAC-Cu芯片在血清 和海马中都能捕获的蛋白质数是 18个。(2)血清中检测到的 中文 摘 要 差异蛋白质:在WCX-2芯片上，损伤后共有53个蛋白质峰 的相对强度与手术对照组相比有显著性差异 (P0.05);另 有53个蛋白质峰在对照组未检到。在IMAC-Cu芯片上，损 伤后共有 16个蛋白质峰的相对强度与手术对照组相比有显 著性差异 (尸0.05)，并发现19个蛋白质在对照组未检到口 (3)海马中检测到的差异蛋白质:在WCX-2芯片上，损伤 后共有 37个蛋白质峰的相对强度与手术对照组相比有显著 性差异 (P0.05);另有 102个蛋白质峰在对照组未检到。 在IMAC-Cu芯片上，损伤后共有12个蛋白质峰的相对强度 与手术对照组相比有显著性差异 (P0.05)，并发现29个蛋 白质在对照组未检到。(4)血清和海马中均能检测到的差异 蛋白质:在WCX-2芯片上，2718Da,2827Da,3274Da, 16051Da于损伤后4h或 (和)8h在海马中可以检测到，而 在血清中