人疱疹病毒7型膜蛋白pp85的原核表达和应用.pdfVIP

人疱疹病毒7型被膜蛋白pp85的原核表达和应用 中文摘要 目的构建人疱疹病毒7型(HRV7)被膜蛋白pp85的原核高效表达克隆，制备 用于HHV7感染血清学诊断的基因工程抗原。 细胞抗原，并用SephadexG-75层析柱初步纯化，获得HHV7细胞工程抗原。② ORF 应用PCR技术扩增HHV7 U14基因的主要抗原决定簇编码区(328～533氨基 酸)，目的基因与原核表达载体pThioHis A分别双酶切后连接，转化宿主菌 E．coli BL21，IPTG诱导融合蛋白表达，经镍一敖合物琼脂糖树脂柱亲和层析纯 化获得基因工程抗原。Western blot检测重组融合蛋白的特异性。③选择最适 浓度包被96孔ELISA反应板，选择血清标本进行检测，并与Qiagen公司生产的 HlⅣ7IgM和HHV7IgG抗体ELISA检测试剂盒进行比较。 blot 结果HHv7被膜蛋白pp85可在E．coliBL21中高效表达，Western 检测结果表明该融合蛋白可与12份HHV7特异性IgM阳性血清中的i0份 阴性的血清均不与之发生反应。基因工程抗原的各项技术指标与Qiagen公司 ELISA检测试剂盒有较好的符合率。 结论HHV7 385重组蛋白具有良好的抗原性和特异性，进一步完善后可用 于HHv7感染的临床检测，为进一步研制开发新型HHV7诊断试剂提供了重要的 理论和实验依据。 研究生：王英南(病原微生物学) 指导教师：罗兵教授 关键词人疱疹病毒7型；ELISA；被膜蛋白pp85；原核表达；血清学诊断 7 HERPESVIRUS pp85 ABSTRA0’P Toconstruct cloneofhuman 7 Objective prokaryoticexpression herpesvirus to ofefficient for recombinant serological (HHV7)pp85，and antigen prepare of HHV7active diagnosis infection． cellswereinfectedwith harvested．② Methods①SupTl HHV7(Glasgow)and 4 The HHV7ORFUI aa)of sequence(328—533 gene majorantigenepitopescoding the A was