双歧杆菌杆菌及发酵液的抗肿瘤机制的研究.pdfVIP

双歧杆菌杆菌及其发酵液的抗肿瘤机制的研究 硕士研究生： 张伟 指导教师： 黄敏 教授 指导小组： 张卓然 教授 范晓磊 教授 专业名称 病原生物学 摘 要 目的：肿瘤是威胁人类生命的主要疾病之一，治疗肿瘤的方法有 很多，有手术治疗、放射治疗、化学药物治疗、热疗等，这些治疗方 法基本都着眼于直接杀伤肿瘤细胞，常难彻底消灭肿瘤细胞，又易损 伤正常组织，特别是伤害在机体抗肿瘤防御中占重要地位的免疫系统， 尤其是影响细胞免疫。在通常情况下，肿瘤与机体的免疫防御之间处 于动态平衡，这种动态平衡的失调导致肿瘤的增殖与播散。通过调整 宿主防御机制至正常水平有可能控制肿瘤的生长乃至使其消退。双歧 杆菌是一种对宿主无害无毒的生理性细菌，它可以作为一种非特异性 生物反应调节剂通过激活宿主的免疫系统而达到抗肿瘤作用。本实验 通过比较双歧杆菌及其发酵液的抗肿瘤作用，对其抑瘤作用和相关机 制进行初步探讨，为抗肿瘤研究提供新的理论基础和新的应用手段。 方法：取80只昆明小鼠，分别予腹水型肝癌H2：细胞和腹水型肉 瘤s180细胞腹腔荷瘤，各40只。荷瘤后随机分为5组：生理盐水组(Ns)、 环磷酰胺组(CY)、发酵液组、死菌组、活菌组。每组8只，荷瘤24 109、活菌3×109 小时后分别给予NS、CY0．4mg、发酵液、死菌3X 每日一次，每次lml／只，腹腔注射，连续6日。分别观察两种肿瘤细 胞荷瘤小鼠的生存期。另取40只昆明小鼠全部给予腹水型肝癌H：：细 胞，右腋下荷瘤。分组及用药剂量同上，每日一次连续十日，腹腔注 射。于接种13日处死小鼠，取瘤组织称重，并用福尔马林溶液固定， ·l’ 制备病理切片。 X109、 将体外培养的H22、S180细胞株加入NS、发酵液、死菌3 活菌3×109培养不同时间后，MTT法计算抑瘤率。取12只小鼠，荷 瘤S180细胞株，随机分为4组，每组3只，荷瘤24小时后，分别给予 NS、发酵液、死菌3X109、活菌3X 109每臼一次，每次lml／只，腹腔 注射，连续10目。断头处死小鼠，无菌条件下制各脾细胞悬液，在一 37。C环境中培养44小时后 定量ConA下，用1640培养液于5％C02 取出，每孔吸出100m上清夜加入MTI，继续培养4小时后，各孔加 入10(3I山酸化异丙醇，测其OD值，计算淋巴细胞转化率。另取死菌液 加入H：：细胞中，培养48小时，用戊二醛固定制备电镜标本，观察其 超微结构。研究双歧杆菌对体外培养的肿瘤细胞株的抑瘤作用及机制。 结果： 1．双歧杆菌死菌液和双歧杆菌活菌液能够延长荷瘤小鼠的生存 期，抑制肿瘤生长，而双歧杆菌发酵液不能延长其生存期：对由H：： 肿瘤细胞所致的腹水型荷瘤小鼠，死菌液组、活菌液组的生存期平均 对由S180肿瘤细胞引起的腹水型荷瘤小鼠，死菌液组、活菌液组的生 病理切片上可见：双歧杆菌死菌液和双歧杆菌活菌液作用肿瘤组织后， 肿瘤组织内部和间质可见大量炎性细胞浸润，以淋巴细胞和中性粒细 胞为主。 2．双歧杆菌死菌液和双歧杆菌活菌液对肿瘤细胞株有抑杀作用。 在MTT法抑瘤实验中，死菌液组对H：：肿瘤细胞株的最高抑制率为 肿瘤细胞株的最高抑制率为57．34％，对S18。肿瘤细胞株的最高抑制率 8．96％。 为58．04％，而发酵液组的肿瘤抑制率较低，分别为6．05％jfn ·2· 在淋巴细胞转化率实验中，双歧杆菌死菌液和双歧杆菌活菌液的平均 差别(P0．05)，说明死菌液组和活菌液组能够明显提高和激活淋巴细 胞的