体外诱导分化的脐血间充质干细胞治疗脊髓损伤的实验研究.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文 体外诱导分化的人脐血间充质干细胞治疗脊髓损伤的实验研究‘ 摘要 stem cells，MSCs)体外分离培养及诱 目的：探讨人脐血间充质干细胞(mesenchymal 导分化为神经细胞的条件；观察诱导后的MSCs源性神经细胞移植对大鼠脊髓损伤的治疗 效果，为治疗中枢神经系统损伤提供实用的细胞来源。 (mononuclear 中，胰酶消化传代。取传三代的细胞，用流式细胞仪检测细胞表面分子CDIlb、CD34、 CD45和CD44的表达。2．脐血MSCs的诱导分化：采用脑源性神经营养因子BDNF 10ng／nil +维甲酸RA0．5uM+碱性成纤维生长因子bFGF 20ng／ml协同诱导培养三代的脐血MSCs 定向分化。诱导7d后，用免疫荧光染色法检测星形胶质细胞特异标志GFAP及神经元特 异标志MAP2的表达情况。3．体内实验：采用横切法制备大鼠脊髓横断损伤模型，实验大 鼠随机分为三组：PBS组、细胞移植组、单纯手术组，每组10只。损伤术后48h，分别于 损伤部位注入等量的PBS、Brdu标记的诱导后的细胞，单纯手术组损伤后不施加任何干预 鼠进行运动功能评分。用组织学和免疫组化方法检测移植到大鼠脊髓中的Brdu阳性细胞 的存活、迁移情况。 结果：脐血MSCs体外培养三代后，细胞表面CDl 性。诱导分化7d后，大部分细胞的形态类似神经元，免疫荧光染色检测MAP2阳性细胞 占大多数，明显多于GFAP阳性细胞。移植后2～5w，细胞移植组大鼠的后肢运动功能恢 复情况均好于PBS组和单纯手术组(P0．05)。免疫组织化学结果显示植入的细胞可长 时间在宿主脊髓中存活，并向损伤处两端迁移。 结论：人脐血MSCs于体外在特定的条件下可以诱导分化为神经元样细胞为主体的神 经细胞。移植脐血MSCs诱导后的神经细胞可在损伤的宿主脊髓中存活、迁移，并能促进 脊髓损伤后行为和功能恢复。 关键词：脐血，间充质干细胞，神经再生，脊髓损伤，移植 ’[基金项目】山西省2000年科学技术发展计划项目(061049) Ⅱ 山西医科大学硕士学位论文 onInducedDifferentiationofHumanUmbilicalCordBlood Stduy StemCellsfortheTreatmentof Cord Mesenchymal SpinalInjury Abstract theisolationmethodandcultureconditionsof stemcells obiective：Tostudy mesenchymal fiom umbilicalblood to the condition human cord ffrOCB)，and (MSCs)derived exploreoptimal theMSCstodifferentiatedintoneuralcellsinvitro．Toobservethefunction ofinducing recov