嗅鞘细胞联合神干细胞脑内移植治疗帕金森病的实验研究.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 嗅鞘细胞联合神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究 李升曾水林 东南大学 治疗作用。方法1、NS盘培养：取E14．5dSD大鼠腹侧中脑组织制备成单细胞悬液，接种到含有表皮生 factor- 长因子(Epidermalgrowthfactor,EGF)，碱性成纤维细胞生长因子(Fibroblastgrowth basic，bFGF,)B27(B27 检测。2、0E盘培养：取E14．5dSD大鼠两侧嗅球组织制备成细胞悬液，离心后去上清，将细胞浓度调整 到1X 养。用P75免疫组化法，P5／Nestin， 制备PD大鼠模型。将成功PD大鼠模型随机分成5组，即假手术对照组(注入生理盐水)；NSC．s移植组； OECs+NSCs，浓度为1．0xl矿细胞／uI，分别移植到PD大鼠吻侧纹状体内。于移植后7d、14d、30d、 60 d检测PD大鼠旋转行为变化后，深麻下处死，灌流固定取脑做冰冻切片，行HE染色和B—u，TH，P d时，绝大多数星梭形且 ”，Brdu／TH，Brdu／P。免疫组化和免疫荧光染色。结果l、0Ecs在培养7 发出2至3个突起，少量呈扁平椭圆形。免疫组化呈PT5阳性反应。2、NSCs培养7 d时，显示典型 d后细胞活性下降，球体积不再增大，球中 的神经球悬浮生长，呈Brdu／Nestin免疫荧光双标阳性；10 心透亮度明显下降；14d后偶见神经球贴壁分化，GFAP和NF免疫荧光检测显示，大部分为红色荧光 标记的GFAP+细胞，少数为绿色荧光标记的NF+细胞。3、0E盘+NSc5共培养组在5d时形成神经球； 10 d时球体积不断增大，球中心透亮度良好；12d后神经球的体积不再增大，开始贴附在0日cs上生 长，可见神经球向四周伸出突起并开始分化；14 GFAP 和NF免疫荧光染色显示，大部分为绿色荧光标记的NF+细胞，小部分为红色荧光标记的GFAP+细胞。 4、细胞移植后第1周，各组大鼠的旋转行为无明显变化；第30天和60天时，与假手术组和模型对照组比 沿针道分布，细胞数量较多。6、Brdu免疫荧光染色显示。移植区Brdu阳性细胞为肌绿色荧光标记，大多 数细胞较小，无突起，呈圆形或椭圆形，少数呈多边形或不规则形态。随着时间的推移，Brdu阳性细胞数 量越来越少。7、TH免疫荧光显示，从第7天起，在移植区可见胞浆呈罗丹明红色荧光标记的1H阳性神经 元(15-27个，视野)。呈圆形或椭圆形。无明显突起，分布在针道与纹状体实质的交界处{在第30天，在 区也可见少数罗丹明红色荧光标记的TH阳性神经元。经过图像处理和数据统计，0EG+NSo移植组111 化的作用。其中分化成神经元的比例高于星形胶质细胞，并有部分可以分化为TH阳性神经元。3、 善，但联合移植优于单独移植。4、在体移植情况下，0眙能够诱导胚鼠中脑来源的NSCs向111阳性神经元 分化。5、OECs可供选择用于中枢神经系统损伤修复和再生的理想替代种子细胞，与NSCs联合移植效果 更好。 关键词 嗅鞘细胞；神经干细胞；细胞培养；脑移植；免疫组织化学；免疫荧光；帕金森病；大鼠 ABSTRACT OfintracerebralOfneuralstemcellsand Experimentalstudy co-graft cellsfor Parldnsondisease olfactoryensheathingtreating