外伤性癫痫灶形学与基因表达的研究.pdf

T宗烽燧圭造文 强伤性癫痫灶形态学与基因表达的研究 中文擒要 外伤性癫痫灶形态学与 基因表达的研究 专 业： 法医学 硕士研究生： 丁宗烽 导 师： 竞花兰教授 摘 要 1．研究目的 流行病学调查显示，我国癫痫的患病率为3．5‰～4．8‰，癫痫患者总数约 brain 1000万。脑外伤(Traumatic injury；TBI)后发生癫痫的危险性比正 常人群高3倍以上，是导致癫痫发作的主要因素之一。国内报告外伤性癫痫患 traumatic 者占癫痫患者总数的14％～45％。外伤性癫痫(Post epilepsy； PTE)又称脑外伤后癫痫，文献报告脑外伤后外伤性癫痫的发生率为4％～53％。 临床上报道采用全数字化偶极子定位、三维图像融合长程视频脑电监测系统(癫 痫刀)检查定位癫痫灶，采用癫痫灶切除手术治疗外伤性癫痫，术后有效率达 100％，显效率82％，但产生和维持癫痫灶局部神经元高兴奋性的分子机制并 不清楚。学者们认为癫痫病灶脑组织放电活性的生物学机制不清，很有可能与 基因表达的变化有关。 本实验观察外伤性癫痫患者癫痫灶皮质神经系统的形态学变化，结合利用 图像分析系统进行量化指标测定，分析探讨外伤性癫痫的病理形态学基础；并 利用基因芯片筛选外伤性癫痫灶与非外伤性癫痫灶皮质的差异表达基因，建立 外伤性癫痫发生发展的基因表达谱，初步分析差异表达基因的功能及其与癫痫 发生发展的关系，为外伤性癫痫的临床治疗及法医学鉴定研究提供方向；分析 差异表达基因结果的稳定性，并结合外伤性癫痫的形态学基础以及免疫组化指 标的测定，为外伤性癫痫的法医学鉴定提供相关实验指标。 T宗烽硕士论文 外伤性癫痫灶形态学s基嗣表达的研究 中文摘要 2．研究方法 本实验共收集癫痫患者癫痫灶皮质30例，分为两组，其中脑外伤后癫痫患 者15例(外伤性癫痫组)、非脑外伤后癫痫患者15例(非外伤性癫痫)，对应 于各癫痫灶的部位收集失血性休克死亡者脑皮质共15例(对照组)。 2．1外伤性癫痫流行病学分析：针对文献报导的外伤性癫痫的各种危险性 因素，对本研究所收集的外伤性癫痫患者临床病历进行统计学分析，为法医学 鉴定提供相关科学依据。 2．2形态学观察：对所收集的标本均进行HE染色、电镜和突触素、NOGo_A、 胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色观察；采用图像分析系统对神经元形态、细胞 器形态及免疫组化指标进行量化指标测定。 2．3基因芯片观察外伤后癫痫差异表达基因：首先提取所收集外伤性癫痫 组与非外伤性癫痫组的癫痫灶皮质总RNA，质量检测合格后经逆转录标记不同 的探针与人类eDNA表达谱芯片杂交，将杂交结果扫描得到的图像重叠，由Image Gene310软件分析信号的强度和比值，实验数据按照RMA微阵列分析法标准化， 采用IBM开发的Geneswork对差异表达基因进行聚类分析。 3．研究结果 3．1外伤性癫痫的流行病学分析 外伤性癫痫患者男女比例之间没有显著差别，癫痫灶部位多见于颞叶和额 叶；功能区局灶性脑挫裂伤引起的局灶性皮层脑出血是外伤后发生癫痫的重要 危险因素。本研究中外伤性癫痫患者中CT未见明显病灶者占60％，说明外伤 性癫痫患者CT等影像学检查并不一定能够检测到癫痫病灶，神经系统查体有 70％的患者未见明显体征。术后对病人进行随访，根据Engel分级，I级23 例，11级15例，ⅡI级7例，无Ⅳ级患者。外伤性癫痫患者采用癫痫灶切除的外 科治疗，病程超过20年以上者，远期疗效Engel分级评价差于病程较短患者。 3．2HE染色结果 与对照组比较，外伤性癫痫灶皮质样本均显示不同程度的神经细胞核固缩，