斯氏狸殖吸虫半氨酸蛋白酶cdna克隆、表达及虫体组织定位的研究.pdf

斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶cDNA克隆、 表达及虫体组织定位的研究 摘 要 背景：斯氏狸殖吸虫散在流行于我国四川、重庆等15个省市自治区， 给人们身体健康和国家经济建设造成了极大的危害。半胱氨酸蛋白酶存在 于人类、寄生生物等多种动物体内。作为寄生虫的主要消化酶之一，半胱 氨酸蛋白酶在寄生虫与宿主的相互关系上具有重要的作用。由于该酶在寄 生虫病的免疫诊断、疫苗及化疗药物的研制上具有广阔的应用前景，因而 寄生虫半胱氨酸蛋白酶正受到越来越广泛和深入的研究。然而对于仅流行 于我国的斯氏狸殖吸虫，其半胱氨酸蛋白酶尚无相关研究。 目的：1、克隆斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶eDNA，获得其序列。2、 进行原核表达，获得表达产物，并检测其免疫反应性。3、对半胱氨酸蛋白 酶在斯氏狸殖吸虫的虫体表达进行组织定位。 方法：l、从四川兴文县采集溪蟹，分离斯氏狸殖吸虫囊蚴，经动物感 PCR中所用引物为根据相关虫种半胱氨酸蛋白酶保守氨基酸序列设计的 简并引物。扩增片段纯化后，克隆入pUCm-T载体并测序，然后利用 DNASIS程序推导其氨基酸序列，并与其它相关虫种半胱氨酸蛋白酶氨基