猪传染性胃肠炎测试剂的研制及快速诊断方法的研究.pdf

摘要 N蛋白，经Ni2+-N1‘A金属螯合层析柱纯化后获得纯化的N 肠杆菌DH5a，表达重组TGEV 蛋白。对纯化条件进行优化，得到最佳纯化重组TGEV N蛋白的方法pf将大肠杆菌DH5a 菌体沉淀物经裂解液(含有Immol／L Bradford法测定蛋白质含量为154．7；lg／m1．4797l_tg／ml，推算每克大肠杆菌菌体沉淀物可获 得纯化重组TGEV N蛋白1．52rag。／o 以重组TGEVN蛋白作为诊断抗原建立了两种检测抗体的诊断方法。I在Dot．ELISA中 其抗原最适包被量为1．25p∥点，抗原预点膜4C可保存5周以上，特异性实验表明其与猪 轮状病毒、猪流行性腹泻病毒等肠道腹泻性病毒均无交叉反应。在间接ELISA中，最佳抗 原包被量为O5l岭／孔，封闭液为含5％脱脂奶粉的PBST，待检血清最适稀释倍数为200 倍，作用时间为30min，底物液最佳作用时间为10min。y 以纯化的重组TGEV N蛋白免疫BALB／c小鼠制备诊断用单克隆抗体。『按常规方法进 行细胞融合，用