人脐血细胞和胚骨髓间充质干细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑病的实验研究.pdf

生耋堡堕主堡苎：生衄蜘胞和胚胎fl}照间亮质干细胞移植潴疗新生戈飙缺氧缺觑性脑痫的实箍研究 人脐血细胞和胚胎骨髓间充质干细胞移植 治疗新生大鼠缺氧缺血性脑病的实验研究 专 业：癔理学与痣差萋生理学 博 士 生：朱美玲 指导教师：李树浓教授 摘要 醚善激疗技术熬发矮，产辩程瑟生jL嚣疗保毽发展遗逮，毽缺羲缺矗骶致懿 脑病在新生儿中发病率米见降低。由于缺氧缺血导致发育中的脑髓鞘形成不全、 自质受损，脑部形成固有病变，目前尚无有效的治疗方案。采用神经干细胞移植 治疗中枢系统涟痰病是泛+多年熬臻究熬点，也取得了一定赘戏暴，毽麦手受缀 胞米源、伦理道德等诸多因素影响，其临床应用受限。近年的研究发现，造血干 stem／progenitorcelis，HSPC)可以分化为神经细胞， ，祖细胞(Hematopo[etic {奉羚培养酶痨盘CDl33。不莰装表达享枣经嚣、基影荻矮绥缒，纛最还表达棱营磷 酸二酯酶等少突胶质细胞的特征性抗原。面脐血来源广泛、细胞原始、移植时不 umbilicalcord 存在伦理障碍，那么人脐血细胞(Human blood，HUCBC)数量、 Ischemic 覆薰帮萋本生彩学将往是誉其备渗疗漆襞缺瘢性鏊滚(Hypoxic 脐m外，怒否还存在其它干细胞来源?近年的研究发现成人骨髓间充质干细胞 Cells，MSCs)灞潼潜辘大、驻跨耧系分纯海神经鳃脆，在 Stem (Mesenchymal 治疗神经系统疾瘸方面具有应用藏景。然而随着外科手术技术的发展，大创伤性 手术越来越少，细胞来源受限；来源于成人骨髓，细胞免疫分子表达成熟，异体 间移植存在韵免疫捧斥爱瘟不可避免。那么建否可黻欤缁飓较潦始懿糕狳曹鬣分 Fetal Stem Cells， Mesench37real 离壤莠出MSCs?胚胎嚣髓阅兖质干细胞(Human 立垡墨竖主燕羔三一尘壁兰塑矍登璧塑量墼蹩童蓬王塑坚茔壁塑堡堑兰茎墼氅整璧垒堡壁堡箜塞墼墅窒 改善HIE所致的功能缺陷?这些就是本研究的主要目的。 必戆，器震以下4都傍研究： 镰一部徐：ItlICBC熬本生物学特整磷究 I．1脐血多项指标测定 前两已述，脐血HSPC可以分化为神经细胞，那么HSPC含量与脐血神经细 胞分化潜能正稿关。为此，在本研究的第一部份酋先随机统计分孛斥24份新生儿 Cells，TMNC)、总集落形成单位(Total Cells．TCFC)、TCD34+ Colony-forming (Total ±0。18x 109、(O。57±0．43x ±1．08。结果表明新鲜脐盘富含HSPC，联涿蕾脐矗具备强大翡孝枣经细魏分纯 潜能。 1．2 HUCBC分离、冻存方法的研究 为r便于随时为临床掇镞HUCBC，脊必鼹对缎胞进章亍冻存；患予新鲜脐血 {搴积大，蕾先须对弼e魏C避季亍分离，雾豫多众矗浆毒霪盔缍纛，爨越，分离技本 对保障分离后HUCBC数撼非常重要。在本课题中通过反复实验擞索，建立了～ 种改良羟乙基淀粉(hydroxyethylstarch，ttES)分离方法，经该方法分离后， 2)％、(89．啦28)％、 脐血中TNC、TMNC及TCD34+细胞获得率分别离达(90．o