人教版生物选修一专题2《微生物的培养与应用》ppt课件.pptVIP

* 专题二 微生物的培养与应用 课题3 分解纤维素的微生物的分离 一.基础知识 ㈠.纤维素与纤维素酶 1.纤维素 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成 的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。 思考：纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨，但却不会在地球上大量的积累，为什么？ 纤维素能被土壤中某些微生物分解 利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 2.纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX酶(内切酶)和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维二糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 纤维素 一.基础知识 ㈠.纤维素与纤维素酶 能分解纤维素的微生物，有各种细菌、真菌和少数放线菌。 一.基础知识 ㈠.纤维素与纤维素酶 3.纤维素的分解： 一.基础知识 ㈡.纤维素分解细菌的筛选： 1.方法： 刚果红染色法。 刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 2.原理： 一.基础知识 ㈡.纤维素分解细菌的筛选： 该方法可以通过颜色反应直接筛选。 一.基础知识 ㈡.纤维素分解细菌的筛选： 3.优点： 二.实验设计与操作 ㈠.实验设计： 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 ①分布环境 1、土壤取样： 富含纤维素的环境中 操作步骤 由于生物适应一定的环境，环境对生物有选择作用，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 ②原因 ③实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。 ④讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？ 答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。 2、选择培养 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。 ①目的： 阅读书本P29 纤维素分解菌的选择培养基 配方，回答问题。 答：用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照。或者将纤维素改为葡萄糖。 2、选择培养 ②制备选择培养基： A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 答：是液体培养基，原因是配方中无凝固剂 （琼脂） B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有， 是如何进行选择的？ 答：有选择作用，本配方中以纤维素作为 唯一碳源，只有能分解纤维素的微生物可以 大量繁殖。 C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30 mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30 ℃下振荡培养1～2 d，至培养基变混浊。吸取一定的培养液（约5 mL），转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊。 ③操作： 2、选择培养 提示：在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。 〖旁栏思考题〗为什么选择培养能够“浓缩” 所需的微生物？ 按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释101～107倍。 3.梯度稀释 4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上 ⑴制备鉴别培养基: 配方见书本29页。操作过程见课题1 （2）涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬 液各取0.1ml涂布到平板培养基上，30℃倒置 培养。 5.刚果红染色法 方法一：先 ，再加入刚果红进行颜色反应。 方法二：在 时就加入刚果红。 培养微生物 倒平板 〖旁栏思考题〗这两种方法各有哪些优点 与不足？ 方法二 方法一 缺点 优点 染色法 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐 刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便不存在菌落混杂问题 1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈 2.有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。 在产生明显的透明圈的菌落，挑取并接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，可获得纯化培养。 6、纯化培养 提示：课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为惟一氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌落。 本课题先通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在鉴别培养基上。其他步骤基本一致。 〖旁栏思考题〗本实验的流程与课题2中的 实验流程有