microrn-30a-5p通过抑制自噬阻止肝星状细胞激活.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………5 英文缩写……………………………………………………………………9 研究论文microRNA．30a．5p通过抑制自噬阻止肝星状细胞激活 。前言…………………………………………………………………………………………．1月U舌…………………………………………………………………………………………·l0 材料与方法……………………………………………………………11 结果……………………………………………………………………21 附图……………………………………………………………………25 讨{仑…………………………………………………………………………………………．36 结{仑…………………………………………………………………………………………．38 参考文献………………………………………………………………38 综述microRNA在慢性肝病和肝癌中的作用…………………………．．40 致谢…………………………………………………………………………………………………56 个人简历…………………………………………………………………．．57 万方数据 中文摘要 摘 要 fibrosis，I-IF)是肝脏在受到诸如病毒、毒物、药物、 肝纤维化(hepatic matrix，ECM)过度沉积为主要特征的慢性肝脏疾病，细胞外基质的过度 stellate cell，HSCs) 沉积是肝纤维化发生的基础，而肝星状细胞(hepatic 的激活是发生肝纤维化的中心环节。在正常情况下的HSCs处于静止状态， 当肝脏受到各种致病因子刺激时，HSCs被激活转化为肌成纤维样细胞， 激活后的HSCs发生一系列的变化，如大脂滴消失，细胞增殖加快，胶原 开始大量沉积。与此同时，HSCs的激活伴随着“自噬潮”的发生，自噬抑 制剂会在一定程度上阻止HSCs向肌成纤维样细胞的转化。自噬 下，细胞内一些功能失调或者生产过剩的细胞器会被包裹形成自噬体，这 些自噬体与溶酶体融合而发生降解，降解的产物经再利用释放ATP，为细 胞应对外界压力提供足够的能量。 基因mRNA 录后水平调控基因表达的效果。目前已发现成熟的miRNA有35828种， 调控着人类大约l／3的基因表达。miRNA一30生物学作用十分广泛，目前 诸多研究证明miRNA．30参与调控细胞增殖、分化和免疫；参与机体生长、 衰老等过程的调控，并在疾病尤其在肿瘤的发生与发展过程中发挥着重要 抑制Beclin．1的表达实现对自噬的抑制作用。 miRNA在诸多生理、病理过程中发挥着重要作用，但它与HSCs激 活方面的研究甚少。对于miRNA是否可作为治疗肝纤维化的潜在方法， 本实验建立了miRNA．30a-5p过表达和敲低的模型。 进行初步探讨 方法：本实验通过体外培养HSCs，应用细胞转染技术转染 万方数据 中文摘要 miRNA一30a．5p激动剂(miRNA．30a．5p (miRNA一30a一5p 和激活的影响。应用人血小板衍生生长因子(PDGF—BB)作为自噬诱导 PCR (ImPCR)技术检测mRNA的表达；Westernblot技术检测细胞中蛋白的 变化；用吖啶橙染色法观察自噬酸性小体的形成；细胞免疫荧光化学染色 法检测自噬发生时自噬标志性蛋白LC3的改变。 结果： l应用westernblot技术检测PDGF干预终浓度分别为0