第二章沉淀法摘要.pptVIP

用有机溶剂沉淀蛋白质，需加入的有机溶剂量，一般以体积为单位计算： V＝需加入有机溶剂的体积 V0＝蛋白溶液的原始体积 S1＝蛋白溶液中有机溶剂的浓度(体积百分浓度) S2＝蛋白溶液中欲达到的溶剂浓度(体积百分浓度) 如果使用的有机溶剂含量不是100％而是95%，则公式中的100应改95，余此类推。 需要指出： （1）低温下操作 由于有机溶剂加入水溶液时产生放热反应会引起蛋白质变性 有机溶剂预冷至-10℃，在低温下进行 第二章 沉淀法 沉淀法（溶解度法）—是纯化生物大分子物质常用的一种经典方法优点：操作简单，成本低廉分类：盐析沉淀 有机溶剂沉淀 选择性沉淀 第一节 基本原理 原理： 根据各种物质的结构差异性（如蛋白质分子表面疏水性基团和亲水基团之间的差异性）来改变溶液的某些性质（如pH、极性、离子强度、金属离子等），进而导致有效成分的溶解度发生变化。  一、盐析法 原理：是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升（盐溶），但当盐浓度增高到一定数值时，其溶解度又逐渐下降，直至蛋白质析出（盐析）。 原因：盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出。 第二节 沉淀的类型与操作 一般操作步骤（蛋白质分级