第六章重组体的筛选与鉴定摘要.pptVIP

* 第六章 重组体的筛选与鉴定 将目的基因与载体连接形成重组子,然后通过各种方法将重组子导入宿主细胞,得到所需要的带有重组DNA的转化子是基因工程的目的所在. 何谓转化子? 所谓转化子就是导入外源DNA后获得了新的遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞. 为什么对重组子要进行鉴定筛选? 在转化反应中,并非所有的细胞中都转入重组DNA分子,即使所有的受体细胞都变为转化体,所获得的转化子仍是多种类型的DNA分子,原因是在连接反应中会有以下几种情况发生: 载体和一个或数个串联目的基因连接 载体发生自连 目的DNA分子发生自连 未发生连接反应的载体和目的DNA片段(更多) 为什么对重组子要进行鉴定筛选? 因此,在成千上万个转化子中，真正含有期望的重组DNA分子的比例很少，为了将含有外源DNA的宿主细胞和不含外源DNA的宿主细胞分开，以及将含有正确重组子的宿主细胞和含有其他外源DNA的宿主细胞分开，就需要设计出最易于筛选重组子克隆的方案并加以验证。 常用的重组子筛选和鉴定方法 重组子大小的鉴定(质粒DNA的快速提取鉴定) 重组子酶切图谱鉴定(限制性核酸酶酶切片段 大小鉴定) DNA序列分析 同源性分析鉴定(原位杂交) 质粒载体的抗性标记筛选 噬菌体包装容量的正性筛选