利奈唑胺体外诱肠球菌耐药及耐药机制的研究.pdfVIP

目 录 I掣哪哕磐翌掣攀攀 一、摘要 中文论著摘要………………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………．．3 二、英文缩略语…………………………?……………………………………………‘5 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………“6 刖舌…………………………………………………………………………………………………………“o 材料与方法…………………………………………………………………………7 结果…………………………………………………………………………………………………………．．9 讨论…………………………………………………………………………………………………………15 6 结j沧…………………………………………………………………………………………………………1 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………17 五、参考文献…………………………………………………………………………l8 六、附录 综述…………………………………………………………………………………………………………21 致谢………………………………………………………………………………29 个人简介…………………………………………………………………………·30 ·中文论著摘要· 利奈唑胺体外诱导肠球菌耐药及耐药机制的研究 目 的 近lO年来，由肠球菌引起的医院感染越来越受到重视，美国医院感染监视系 统已将其列为医院感染的第二大病原菌，占所有医院感染原因的12％。而我国肠 球菌感染亦有明显增加的趋势。在引起医院感染的肠球菌中约18％50％对万 古霉素耐药，这些耐万古霉素肠球菌(vancomycin-resistantEnterococci，VRE)对多 种抗菌药物均耐药，如对青霉素的耐药率高达97％，对高浓度庆大霉素耐药率达 52．1％，对高浓度链霉素耐药率达58．3％，给临床治疗带来巨大困难。 利奈唑胺是新型噫唑烷酮类抗生素，被认为是目前治疗VRE感染和控制 VRE医院感染暴发流行的唯一药物。然而，随着该药的大规模上市使用，在临床 工作中不断有耐利奈唑胺菌株的报导。因此，对耐利奈唑胺肠球菌的研究对临床 用药有较大意义。本实验从利奈唑胺对肠球菌耐药的诱导作用入手，先让肠球菌 在体外长期接触小剂量利奈唑胺，然后逐步增加利奈唑胺的浓度，观察肠球菌的 生长情况，判断肠球菌对利奈唑胺产生继发耐药的难易。并通过比较敏感肠球菌 及耐药肠球菌23srRNA的基因变化，探讨肠球菌对利奈唑胺的耐药机制。旨在引 起广大医务人员的重视，合理用药，减少耐药的发生。 方 法 首先对9株临床分离的肠球菌及1株质控菌株进行鉴定和培养，然后采用2009 年CLSl标准推荐的琼脂二倍稀释法进行药敏试验，得到这10株肠球菌对利奈唑 胺的MIC值。接下来进行多步法诱导耐药试验，就是将肠球菌依次接种在利奈唑 胺浓度成倍增加的MH琼脂培养基中，初始浓度为1／4MIC，每个药物浓度培养 3~5代，当细菌生长不良时可降低浓度重复传代培养，每个药物浓度最多培养10 代。对诱导出的耐药菌株进行琼脂二倍稀释法测定MIC值，比较诱导前后耐药性 变化。再对肠球菌23s 如果该基因中存在G2576U突变就会被限制性内切酶MaeI切为两段，反之不能。 Gis(天能)凝 应用酶切、电泳的方法使野生基因与突变基因分离，再通过Tanon 胶图像分析系统分析结果，得到耐药菌中包含的G2576U突变数目。 结 果 上述9株临床分离肠球菌以及质控菌株经过体外诱导耐药后，MIC值均显著 增高，分别增加了8--64倍，并经稳定性实验证实为稳定的耐药菌株。提示肠球菌 经过体外不断地接受抗菌药物的压力，容易对利奈唑胺产生继发耐药，这与