硫化氢供体对实性肝硬化大鼠门静脉压力的影响及其相关酶学研究.pdfVIP

摘 要 目的： 本课题将复制硫化氢(H2S)过载的正常和肝硬化大鼠模型，分别在 NO 、CO 抑制及不抑 制两种状态下，观察 H2S 含量过载对肝硬化大鼠门静脉压力的影响及其相关酶学的变化， 以探讨内源性 H2S 在肝硬化门静脉高压中的作用，进一步研究肝硬化发生发展的机制，为 肝硬化门静脉高压的临床治疗提供理论基础。 材料和方法： 1. 动物分组、肝硬化模型复制及干预剂实施：将72 只雌性SD 大鼠随机分为肝硬化模型 组（40 只），正常组（32 只）；肝硬化模型组大鼠皮下注射40% 四氯化碳棉籽油溶液,首剂 0.5ml/100g, 后每隔4 天注射一次, 每次0.3ml/100g, 共注射12 次, 15% 乙醇溶液作为唯一饮 用液体, 并给予高脂高胆固醇饲料。根据预实验肝硬化形成经验（第一次注射起实验第 52 天形成肝硬化模型）；正常组大鼠同期皮下注射生理盐水, 剂量同实验组, 采用标准饲料喂 养。造模结束后正常组大鼠随机分为4 组：正常非抑制（NF ）组,正常抑制（NC ）组，过载 H S 正常非抑制（SF）组和过载H S 正常抑制（SC ）组，每组8 只；肝硬化模型组随机分 2 2 为4 组：肝硬化非抑制（HF ）组，肝硬化抑制（HC ）组, 过载H2S 肝硬化非抑制（SHF） 组和过载H S 肝硬化抑制（SHC ）组，每组8 只；给予过载H S 组大鼠供体硫氢化钠（NaHS ） 2 2 56umol/kg.d-1 腹腔注射，NO 、CO 抑制组大鼠腹腔注射 L-NAME: 5mg·kg-1·d-1 和 ZnPP: 20umol·kg-1·d-1 颈部皮下注射,总时间为一周。 2. 结果观察：干预结束后，10%水合氯醛麻醉大鼠，应用静脉穿刺针接多导压力换能器 测量门静脉压力；测定门静脉血浆中H2S、NO 、CO 含量；HE 染色观察肝脏病理学变化； 应用免疫组化法观察肝门区门静脉血管内皮细胞和平滑肌细胞中CSE、HO-1 、iNOS、eNOS 蛋白表达，并用计算机图文分析系统半定量检测其蛋白表达强弱，灰阶值越低说明表达越强； 采用Westblot 技术检测肝组织中CSE、HO-1 、iNOS、eNOS 蛋白表达，用凝胶成像系统对 曝光后条带的灰度值进行分析, 同时用β-actin 校正加样量。实验数据用SPSS16.0 统计软件进 行分析，作单因素方差分析，用LSD 法对多个样本均数进行比较，P0.05 示差异具有统计 学意义。 结果： 1. 肝硬化大鼠模型复制 通过病理学观察，模型组大鼠肝脏均达到肝纤维化IV 级或V 级病理阶段，造模过程中 大鼠死亡率在正常范围（20% ）。 2. 大鼠门静脉压力变化 与NF 组相比，HF 、HC 、SHF 和SHC 组门静脉压力明显升高（p 均0.01 ）；与HF 相 比，HC 、SHF 组压力均降低（p均0.01 ）；SHC 组压力低于HC 组（p0.01 ）； 3. 大鼠门静脉血浆中H2S、CO、NO 含量变化 与NF 组相比，NC 、SF、SC 组血浆中H2S 含量升高（p 均0.05 ），NO 、CO 含量均降 I 低（p 均0.01 ），HF 组血浆中H S 含量降低（p0.01 ），NO 、CO 含量均升高（p 均0.01 ）； 2 与HF 组相比，HC 、SHF 和SHC 组血浆中H2S 含量均升高（p 均0.01 ），NO 、CO 含 量均降低（p 均0.01 ）；SHC 组H2S 含量高于HC 组（p0.01 ），NO 、CO 含量均低于HC 组（p 均0.01 ）； 4. 肝门区门静脉血管及肝组织中CSE、HO-1 、iNOS、eNOS 蛋白表达 与NF 组相比，NC 、SF、SC 组门静脉血管及肝组织中CSE 蛋白表达均增强（p 均0.01 ）， HO-1 、iNOS 、eNOS 蛋白表达均减弱（p 均0.01 ），HF 组肝组织中CSE、eNOS 蛋白表达 减弱（p0.01 ），HO-1 、iNOS 蛋白表达均增强（p 均0.01 ），门静脉管壁中CSE 蛋白表达 减弱（p0.01 ），HO-1 、iNOS、eNOS 蛋白表达均增强（p 均