正常肝细胞系cang liver和肝癌细胞系hepg2的定量蛋白质组学研究.pdf

Lj 正常肝细胞系Changver和肝癌细胞系HepG2的 定量蛋白质组学研究 硕士生姓名： 伍登海 指导教师： 王立明教授 指导小组： 梁锐副教授 孙德光博士 专业名称： 外科学 摘要 目的：采用稳定同位素二甲基标记技术研究正常肝细胞系ChangLiver和肝 癌细胞系HepG2的定量蛋白表组学，筛选肝癌的发生、耐药、转移和切除后复发 等病理过程中可能发生作用的差异蛋白，为采用稳定同位素二甲基标记细胞蛋白 的肿瘤定量蛋白质组学研究提供方法学基础 方法：采用稳定同位素二甲基标记技术，使用CH：O和CD：O分别标记正常肝细 胞系ChangLiver和肝癌细胞系HepG2蛋白酶解肽段，并且以阳离子交换色谱一反 相色谱 SCX—RPLc 为分离模式的新型二维微柱液相色谱分离，最后进入LTQ orbiTrap质谱检测。 结果：一共鉴定得到3052个肽段，相对定量1006个蛋白，其中定量至少由 两个肽段鉴定得到的蛋白有519 51．6％ 个，定量至少由三个肽段鉴定得到的蛋 过Gene 共鉴定得到了188个差异蛋白。 结论：1．采用稳定同位素二甲基标记技术，使用CH：O和CD。0分别标记正常肝 细胞系ChangLiver和肝癌细胞系HepG2蛋白酶解肽段，并且以阳离子交换色谱一 反相色谱 SCX-RPLC 为分离模式的新型二维微柱液相色谱分离，最后进入LTQ 0rbiTrap质谱检测，一共鉴定得到188个差异蛋白，这些差异蛋白可能在肝癌的 发生、耐药、转移和切除后复发等病理过程中发挥重要作用，为肝癌的深入研究 提供了大量的生物学资料。 ‘ 2．稳定同位素二甲基标记技术是定量蛋白质组学研究中高效、直接及快速的 化学性引入的标记方法，本实验为采用稳定同位素二甲基标记细胞蛋白的肿瘤定 量蛋白质组学研究提供了方法学基础。 关键词：定量蛋白质组学稳定同位素二甲基标记肝癌质谱技术差异蛋白 line Quantitativeofliverimmortalizedcell proteomics Chang Liv cellcelllineueH andanolivqIIvercancercancer reviL2GpeH e1 Master degreecandidate：Deng．HaiⅥ町 Supervisor：ProfessorLi-MingWang Rui Vice．supervisor：ProfessorLiang Doctor Sun De．Guang Major：Surgery Abstract differential which exertfunctionin Objective：Toidentify proteins may to after hepatocarcinogenesis，resistant surgical andother ofliver hepatectomy pathologicalproeesses，quantitativeproteomics immortalizedcellline Liverandlivercancercellline stable Chang HepG2using WaS isotope labeling isotopedimethyllabelingprofiled．Meanwhile，stabledimethyl US ofCanCel． thebaSic for provided methodologyquantitativeproteomics of of extracted digestsproteins Methods：Quantitativeproteomicsproteolytic liverfiverimmortalized Liverandcancercellline WaS from cellline HepG2 Chang baSedon cation andreversed profiled strong exchangechromatography phase with2DllanoHPLC-MS|MS chromatography SCX—RPLC platformcoupled USing stable WaS isotopedimethyllabeling．StableisotopedimethyllabelingUSing light-labelingformaldehyde CH20 andheavy-labeling thetwocellular proteolyticpeptidesrespectively． Result：3052 1006 were proteinssuccessfullyquan