石蜡包埋肝细胞组织中rassf1a、apc、wif-1基因甲基化检测及其临床意义.pdfVIP

lI[1llllIIIIIIII[IllE I[I 901175 Y1 目 录 中文摘要……_………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………5 检测及其临床意义 前言………………………………………………………………………99月IJ舌．．……………．．……………………………………………………．． 材料与方法………………………………………………………………9 结果………………………………………………………………………14 附图………………………………………………………………………18 附表………………………………………………………………………21 讨论………………………………………………………………………26 结论………………………………………………．．．……………………29 参考文献…………………………………………………………………30 瘤………………………………………………………………………33 致谢……………………………………………………………………………44 个人简历………………………………………………………………………45 中文摘要 检测及其I临床意义 摘 要 目的：肝细胞癌 Hepatocellular 化系统恶性肿瘤之一，近年来其发病率仍有上升趋势，然而其确切的发病 机制目前仍不十分清楚。随着分子生物学的发展，抑癌基因甲基化在肿瘤 是Ras和Wnt信号途径中的分子，它们的甲基化在肝细胞癌发生中的作 用以往已有一些研究报道，但是研究结论还很不一致，这两个基因的甲基 化检测用于临床还存在一定问题；而抑癌基因WIF．1作为Wnt信号途径 中的另一个分子，其在肝细胞癌发生、发展中的作用及I临床意义的报道较 究多采用新鲜组织，但新鲜组织长时间保存困难，大样本、长周期的研究 受到限制，因此，本研究以石蜡包埋的肝细胞癌组织为标本，采用甲基化 1A， PCR，MSP 检测RASSF 特异性聚合酶链反应 methylation specific APC和WIF．1基因的甲基化状态，分析与临床资料、病理学资料及生存 因的甲基化状态的临床意义，阐明WlF．1基因甲基化在肝细胞癌发生、 发展中的作用，以期用于临床诊断及预后判断。 方法： 医院行肝胆外科手术治疗的肝细胞癌组织97例，癌旁肝硬化组织26例。 名病理科医师诊断证实。收集所有患者相关病史、实验室检查结果、临床 病理学资料和肿瘤家族史，通过电话联系或信访的方式对肝细胞癌患者随 访其生存情况。 2抑癌基因启动子区域的甲基化检测方法：蜡块组织总DNA采用传 中文摘要 统的酚．氯仿方法提取，经亚硫酸盐处理后，用WizardDNA纯化试剂盒 APC和WIF．1进行目的片段的扩增，扩增产物通过电泳凝胶成像系统进 行甲基化结果分析判定。 3统计学分析：所有数据均使用SPSS13．0统计软件进行统计学分析， 学意义。 结果： 达及比较 RASSFlA基因的甲基化率在肝细胞癌组及肝硬化组中分别为 APC基因在肝细胞癌组和肝硬化组中的甲基化率分别为63．92％ WIF．1基因在肝细胞癌组和肝硬化组中的甲基化率分别为46．39％ 45／97 ，7．69％ 2／26 ，两组差异有统计学意义 P 0．05 。 的比较 RASSFlA基因的甲基化阳性率在男、女患者中的差异无统计学意义 oRASSFlA 基因在HBsAg阳性和阴性组中的差异无统计学意义 P O．05 中文摘要 APC及WlF．1基因中的甲基化阳性率在有无肝硬化组中的差异无统计学 意义 P O．05 。 料的比较 两组的差异有统计学意义 P 0．05 。门脉瘤栓的有无及临床分期两组中 三个基因的甲基化阳性率的差异无统计学意义 P O．05 。’ 相互关系 联程度，发现三个抑癌基因甲基化表达均不存在相关关系 P O．05 。 后关系 对97例肝细胞癌患者进行电话或通信的方式随访其生存情况，随访 至201 1年3月，随访时间1～105月，其中9例患者失访。该组1年、2 年、3年生存率分别为57．3％，42．1％，35．4％。 WlF．1基因的甲基化状态间生存率比较差异无统计学意义 P O．05 。 结论： 中文摘要 甲基化，检测结果可靠，石蜡包埋组织的甲基化检测有其可行性。 生中起到一定作用。 于HBsAg阴性组，在伴有肝硬化组中甲基化率高于不伴有肝硬化组，而 RASSFlA基因甲基化检测有望用于肝细胞癌高危人群的筛查。 生存期无显著影响，提示这三个基因的甲基化状态不能作为肝细胞癌预后 预测因子。 CpG岛；甲基化 英文摘要 of RASSFlA，APC，WIF-1 Prognosticsigni