结直肠癌组织中苷磷酸化酶表达及5#39;-dfur联合干扰素-α治疗小鼠结肠癌肝转移模型的实验研究.pdfVIP

MasterThesisof Medical 广州医学院硕士论文 C_mangzhouCollege 结直肠癌组织中胸苷磷酸化酶表达及5-DFUR联合干扰 素一Q治疗小鼠结肠癌肝转移模型的实验研究 中文摘要 研究背景： 胸苷磷酸化酶(thymidine endothelialcell factor， 酶，与血小板源性内皮细胞生长因子(platelet--derivedgrowth 性，与肿瘤的生长、转移等有密切关系，在胃、结肠、卵巢等部位的癌组织中的表达 明显高于癌旁正常组织，但结直肠癌组织中究竟是癌细胞还是间质细胞表达TP活性 的问题，一直存在争议，关于TP的预后作用也未有一致意见。由于5．氟尿嘧啶 而发挥细胞毒作用，所以提高肿瘤内TP的活性有增强这些前体药物抗肿瘤的作用。 我们前期体外实验显示类巨噬细胞表达的TP可以降低5-DFUR对结肠癌胞的半数有 效量(50％inhibiting 我们前期的体外实验发现加入干扰素后，可以使5-DFUR对结直肠癌细胞的IC50下 降。本实验通过对结直肠癌标本以两种抗TP抗体染色，并收集部分临床资料进一步 探索TP的表达以及TP与临床特征及预后问的关系；通过对小鼠结直肠癌肝转移模 型应用5-DFUR联合干扰素进行治疗，来探讨两药联合的抗肿瘤效果。 材料与方法： 实验一 l、临床标本 人结直肠癌标本53例取自广州医学院第二附属医院普外科1998年2月至2000 期7例；低分化腺癌4例、中分化腺癌37例、高分化腺癌2例，其它组织类型lO 广州医学院硕上论文 MasterThesisof Medical GuangzhouCollege 例。肿瘤位于左半结肠的有ll例，右半结肠19例、直肠20例、3例未知具体部位。 肠息肉标本17例，腺瘤性lO例，其他7例。 2、抗体和试剂盒 Research (1：400)，此2抗体由日本RocheCenter提供。巨噬细胞标记物CD68的 Acres IgGI(1：100)(East 试剂盒、二抗试剂盒、DAB试剂盒均购自美国Vector公司。 3、染色结果的判定及细胞计数方法 654．1和IC6．203抗体的阳性细胞表现为细胞核或细胞质棕黄色染色，偶尔也可 见到单独细胞核黄染。CD68阳性细胞染色位于细胞膜呈铁锈色。先在低倍视野下选 后分别计算出每种阳性细胞的X士S。 4、统计学分析 0．05时，认为差异有统计学意义。 实验二 l、实验材料 山大学实验动物中心。BALB／c小鼠结肠腺癌细胞株(CT26)，购自美国菌种保藏中 心(AmericanCulture Type 公司日本研究中心提供；5一氟尿嘧啶(5-FU)注射液，江苏南通精华制药有限公司生 海Roche公司。 2、实验方法 脾注射法制备小鼠结直肠癌肝转移模型后，将114只小鼠随机分为6组，术后第 三天开始给药；①生理盐水组：腹腔注射，NS0．4mix5天；②干扰素组：颈部皮下 注射2mg干扰素×l天；③5．FU组：Img／ml +干扰素组：②+⑤方案。每组于术后第10天、15天分别随机处死6只小鼠：剩余 2 MasterThesisof Medical 广州医学院硕士论文 GuangzhouCollege 小鼠待其自然死亡，记录生存时间。观Nd,鼠术前、术后第l、2、3周体重；术后 lO天、15天处死小鼠，摘眼球法取血，送检验科测谷草、谷丙转氨酶、尿素、肌酐； 取处死小鼠肝脏、脾脏称重，计数肝脏表面结节数目，测量最大结节直径，观察结节 有无融合。 3、统计学分析 肝脏表面结节计数资料转化为等级资料后，用f卡方检验比较；各组肝脏