维生素e琥珀酸对黑色素瘤b16荷瘤小鼠抑瘤作用及其机制的实验研究.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 研究论文 维生素E琥珀酸酯对黑色素瘤B16荷瘤小鼠抑瘤作用及 其机制的实验研究 前言……………………………………………………………………8日U舌……………………………………………………………………8 材料与方法……………………………………………………………8 结果……………………………………………………………………13 附图……………………………………………………………………17 附表……………………………………………………………………27 讨论……………………………………………………………………29 结论……………………………………………………………………35 参考文献………………………………………………………………35 综述恶性黑色素瘤的凋亡相关基因……………………………………．．39 致谢…………………………………………………………………………45 个人简历……………………………………………………………………46 中文摘要 维生素E琥珀酸酯对黑色素瘤B16荷瘤小鼠抑瘤作用 及其机制的实验研究 摘 要 Esuccinate， 目的：通过动物实验，研究维生素E琥珀酸酯 vitamin VES；a--tocopheryl 凋亡的影响。通过相关蛋白表达的变化，进一步探讨VES抑制黑色素瘤细 胞生长的作用机制，从而为黑色素瘤治疗提供新的方法及相应的理论依 据。 B1 6细胞悬液接种于各组小鼠右侧背部皮下，每只1×106个，建立小鼠黑 色素瘤移植瘤模型。当多数小鼠荷瘤后开始给药，采用腹腔注射给药方式： 实验组分别给予VES 连续五天，休两天，共两周；对照组给予芝麻油0．05ml／只，给药方法及时 80mg／kg 腹腔注射，每天一次，连续五天。两周后，颈椎脱臼处死各组小 鼠，剥瘤称重，计算抑瘤率；显微镜观察VES作用后的瘤细胞大体形态变 化，透射电镜观察VES作用后的瘤细胞超微结构变化；流式细胞术检测各 13．0统计学软件进行数据处理，统 Caspase．3的蛋白表达情况；运用SPSS 计分析。 结果： 1 呈剂量依赖性。达卡巴嗪组抑瘤率为55．64％，高于VES各组。各组小鼠处 死前的体重比较：VES各处理组与对照组相比，差异无统计学意义 p 0．05 ；阳性对照组体重有较明显下降，与阴性对照组相比，差异有 统计学意义 p O．01 。 2VES可阻滞瘤细胞周期、诱导分化和凋亡：流式细胞分析仪检测结果显示 中文摘要 组与对照组、阳性对照组相比，差异均有统计学意义 p O．01 。 3VES对瘤组织细胞形态的影响： 3．1经苏木精．伊红 砸 染色后，电子显微镜下观察细胞形态：阴性对 照组瘤组织边界不清，细胞密集排列，异型性明显，而VES治疗组 12．5m 性坏死，黑色素颗粒释出，散布于细胞间。 3．2透射电镜观察：在未经VES处理过的阴性对照组移植瘤B16细胞中， 胞膜完整，细胞核大，不规则形，核质比大，常染色质丰富，异染色质较 25mg／kg 作用后，细胞表面微绒毛减少，细胞核变小，核内异染色质增 多，部分浓缩，核质比变小，可见大量典型的黑色素小体：50mg／kgVES 作用后，细胞出现不同程度凋亡改变：胞质中出现空泡，线粒体脊和膜部 分或大部分融合消失，核膜局部向外呈泡状突起，核染色质高度浓缩，电 子密度增高，边集于核膜下，形成新月体状，即凋亡细胞的特征性形态改 变，凋亡半月，但无凋亡小体。 随VES浓度增大而降低，Ca spase．3蛋白表达值随VES浓度增大而升高。 三种蛋白各自比较，VES处理组和阴性对照组，差异均有统计学意义 p 结论： 1 VES对鼠B16黑色素瘤移植瘤生长有显著的抑制作用，且呈一定的量 效关系。 2 VES有双重作用， VES可将细胞阻滞于G0／G1 12．5mg／kg、25mg／kg 期，诱导部分恶性黑色素瘤细胞分化，透射电镜观察可见大量典型的黑色 中文摘要 瘤增殖。 3 VES具有抑制黑色素瘤增殖，致S．100表达减低，降低其恶性程度的作 用。其机制可能是一方面下调Survivin蛋白，调节瘤细胞分化；另一方面 启动Caspase．3依赖的凋亡途径。 4 VES对鼠B16黑色素瘤移植瘤生长有较显著的抑制作用，低剂量诱导分 化，高剂量诱导凋亡，为临床恶性黑色素瘤的治疗和化学药物预防提供了 新的思路和理论依据。 关键词：维生素E琥珀酸酯VES；鼠黑色素瘤细胞B16；细胞周期； 分化和凋亡；S-1 00；Survivin；Caspase一3 on ESuccinate o