腺病毒介导的自免疫调节因子(aire)基因修饰对树突状细胞性状及功能影响的研究.pdfVIP

2 腺病毒介导的自身免疫调节因子（AIRE）基因修饰对树突状细胞性状及功能影响的研究 中文摘要 腺病毒介导的自身免疫调节因子（AIRE）基因修饰对树 突状细胞性状及功能影响的研究 中文摘要 目的：建立大鼠骨髓来源的树突状细胞体外培养体系，检测腺病毒对于树突状细胞的 感染效率，建立AIRE-DC疫苗并鉴定其性状与生物学功能。 方法：（1）取4~6周龄SD大鼠，提取大鼠骨髓细胞，经过红细胞裂解液去除红细胞， 贴壁细胞经细胞因子诱导，获得较高纯度的成熟大鼠骨髓源性树突状细胞 （rBM-DCs），期间每日观察树突状细胞 （DC）形态变化；（2）构建重组AIRE基因 的腺病毒载体（Ad），通过腺病毒感染DC进行特定基因修饰，通过流式细胞术以及 免疫印迹法验证Ad对于悬浮生长的rBM-DCs 以及贴壁生长的DC2.4细胞株的感染 以及基因修饰效率，找出最合适的腺病毒感染复数；（3）提取鼠全细胞肝癌细胞株 RH-35抗原，将AIRE基因修饰的DC负载肿瘤抗原，检测表面分子CD83、CD86、 CD11c的mRNA表达水平，并通过流式细胞术检测CD80、和MHC-II 的表达，研究 AIRE基因对于树突状细胞性状以及生物学功能影响。 结果：（1）骨髓细胞悬液经各类处理以及细胞因子诱导后可获得较高纯度的DC，且 随着培养时间的增长，DC细胞逐渐增大，表现出明显的树枝样或者细足样分叉和突 起，并从半贴壁生长逐渐转变为贴壁生长；（2）腺病毒对于DC2.4细胞株以及rBM-DCs 均具有较高的感染效率，且均能成功对DC进行修饰，其中DC2.4 的最适感染复数为 50MOI，感染效率可达90%以上；rBM-DCs 的最适感染复数为100MOI，感染效率为 70%左右，更高的感染复数则会产生较大细胞毒性；（3）经AIRE基因修饰过的 rBM-DCs经过肿瘤抗原负载的条件下表现出各类细胞表面分子的显著表达上升， CD80、CD83、CD11c与未处理组相比具有显著性差异（p0.05)，CD86和MHC-II 类分子与未处理组相比差异非常显著 （p0.01），同时转染空载体的rBM-DCs表面分 子与为处理组相比无显著性差异。而DC2.4在感染前后表面分子表达均较低且无显 著性差异。 I 中文摘要 腺病毒介导的自身免疫调节因子（AIRE）基因修饰对树突状细胞性状及功能影响的研究 结论： 1. 腺病毒对于原代DC 以及DC细胞株均具较高的感染效率，但对于细胞株的感染效 率更高； 2. 腺病毒对rBM-DCs 的最适感染复数较DC2.4高，悬浮细胞相对于贴壁细胞较难感 染； 3. AIRE可以增高负载抗原后的rBM-DCs表面分子CD80、CD83、CD86、CD11c和 MHC-II类表达，其中CD86和MHC-II类分子表达显著增高。 4. DC2.4细胞株缺乏DC细胞应该表达的各类表面分子，且肿瘤全细胞抗原刺激后表 达亦没有显著变化，表明其经过正常细胞永生化处理，且长期传代后存在DC生物学 功能的丧失。 关键词：树突状细胞AIRE 表面分子 腺病毒 免疫治疗 作 者：王柔抒 指导教师：庄志祥 II 腺病毒介导的自身免疫调节因子（AIRE）基因修饰对树突状细胞性状及功能影响的研究 英文摘要 Theresearchaboutautoimmuneregulator （AIRE） on effectsoffeaturesandfunctionsofdendriticcellsmediated byadenovirus