生物技术基因工程篇精要.pptVIP

1、限制性内切酶法（鸟枪法或散弹法） 4、通过PCR把目的基因扩增出来 * （2）M13噬菌体（M13 phage） 特点： 单链线性DNA分子 大肠杆菌被感染后，并不死亡，只是生长缓慢，而新的噬菌体被释放到菌体外。 感染大肠杆菌后，单链线性DNA分子可转变成双链复制型(RF)。从大肠杆菌中分离出双链复制型的M13还可作为克隆双链DNA的载体 具非必需区(IS) 从宿主菌体中释放出来的M13噬菌体粒子只含单链DNA,其中包含有被克隆的外源性DNA片段中两条中的一条，因此可用来制备单链DNA探针，也可以用作DNA测序的模板。 筛选：蓝白筛选 ◇是指含有入噬菌体粘性末端的杂种质粒。 ◇ 由入噬菌体的cos区与质粒重组建造而成。 ◇在宿主细胞中可以作为正常噬菌体进行复制，但不表达噬菌体的任何功能。 （3）粘尾质粒(cosmid)/粘性质粒/粘粒/cos质粒 cosmid的构造特点: ◇含有抗药标志和复制起始部位； ◇一个或多个单一酶的限制位点； ◇带有入噬菌体粘性末端； ◇分子小，可容纳大的外源DNA片段。 将染色体端粒序列（TEL）、自主复制序列（ARS）、着丝粒（CEN）以及必要的选择标记（HISA4