coh-2-3急性前髓白血病hl60细胞的作用及其机制研究.pdf

＼1769162 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………4 二、英文缩略语………………………………………………………………………7 三、论文 氤f‘言………………………………………………………………………………8日U舌………………………………………………………………………………8 实验材料与方法…………………………………………………………………9 实验结果…………………………………………………………………………11 讨论………………………………………………………………………………16 结论………………………………………………………………………………18 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………19 五、参考文献…………………………………………………………………………20 六、附录 综述………………………………………………………………………………23 在学期间科研成绩………………………………………………………………33 致谢………………………………………………………………………………34 个人简介…………………………………………………………………………35 COH-2-3对急性前髓白血病HL60细胞的 作用及其机制研究 目 的 ．3-one(COH．2．3)对急性前髓白血病HL60细胞的作用及其作用机制。 方法 一、MTT法 应用M1vr方法检测COH．2．3和顺铂对HL60细胞的生长抑制作用。取对数 生长期细胞，调整细胞浓度，以每孔lx103个细胞密度接种到96孔板，每孔加200I，tL 细胞悬液。实验分组：药物处理组(药物浓度分别为0．Ol，0．03，0．1，O．3，1．0， 3．01ag／mL)；阴性对照组(只加培养细胞，不加药)；空白对照组(只加培养基)， 每个组设6个复孔。将96孔板放在37。C含5％C02的孵箱中培养44小时后，每 DMSO震荡10分钟 (MTT)溶液继续孵育4小时后，吸出上清液每孔加1501aL 后应用酶标仪测各孔吸光度(OD)值，本试验重复三次，按以下公式计算抑制率： 抑制率=(1．给药组平均OD值／对照组平均OD值)x100％。 二、流式细胞术 通过流式细胞术碘化丙锭(PI)单染检测药物COH．2．3对HL60细胞周期分 布及凋亡的影响。取对数生长期的细胞，以lxl05个／mL的密度接种到培养瓶中。 处理6，12，24小时)，阴性对照组(只加培养细胞，不加药)。收集细胞，用PBS 胞仪检测细胞各周期百分率和凋亡细胞百分率。 三、吖啶橙(A0)／溴乙锭(EB)双染色法 通过吖啶橙(A0)／溴乙锭(EB)双染色法观察凋亡细胞的形态学改变。取 对数生长期细胞，以1x105个／mL的密度接种到培养瓶中。实验分组：药物处理 x 药)。收集细胞，调整细胞浓度至l106个／mL，取100pg／mL的AO／EB混合液1pL 加到251aL的细胞悬液中吹打混匀，取一滴加到载玻片上盖上盖玻片，免疫荧光显 微镜下观察细胞形态学改变。 四、免疫荧光 通过免疫荧光技术观察药物处理组细胞的微管蛋白形态学变化。取对数生长 期细胞，以lxl05个／mL的密度接种到培养瓶中。实验分组：药物处理组 抗体室温避光孵育2小时，l：100的Hoechst33342染核10分钟，50％甘油封片， 荧光显微镜下观察细胞微管形态变化。 blor)法 五、蛋白免疫印记(Western 通过Westernblot方法检测药物处理后细胞内的蛋白表达情况。取对数生长期 细胞，以1x B，