sall4基因恶性血液肿瘤中的表达研究.pdf

8S￡￡j0羔 Ul UlIII II…lIlll0 中文摘要 ILIlll]lll 801864 SALL4基因在恶性血液肿瘤中的表达研究1 摘 要 背景：近年来，在治疗血液系统的恶性肿瘤上虽取得很大的进展，但治疗 效果仍不尽人意，多数患者在完全缓解后还会出现复发，并最终死亡。常 规化疗只能杀灭增殖周期的细胞，目前单克隆抗体的靶向治疗研究较多， 然而很多单克隆抗体没有杀伤肿瘤细胞的能力，抗体对肿瘤相关抗原专 一性不强，如果仅针对增殖周期的肿瘤细胞表面标志，或许会取得暂时的 明显临床疗效，但因肿瘤干细胞的存在终会导致疾病复发。因此要根除恶 性血液肿瘤的前提仍然是弄清不同起源细胞的分子标志，直接针对恶性血 液肿瘤干细胞的靶向治疗，从源头上对恶性血液肿瘤进行治疗，可望成为 治愈恶性血液肿瘤的一个新策略。 、 的成员之一，在胚胎干细胞增殖和胚胎发育中起重要的调控作用。越来越 多的研究表明SALL4基因与细胞死亡、癌症、DNA复制／修复有关。正 由于SALL4致瘤的潜能和维持干细胞的自我更新和多能性等特性，使人 们开始关注它与恶性血液肿瘤发生的关系，从而进一步了解SALL4在血 液肿瘤发病机制中的作用。 目前常用的几种检测目的基因表达的方法有：形态学方法，荧光原位 insitu 杂交(Fluorescence chain 检出率较低的弊端，聚合酶链反应(Polymerase 可以从105．106正常细胞中检测出一个目的细胞，是公认的比较敏感的检 测方法，但传统PCR技术只能做到定性或半定量检查，不能精确定量。 一种理想的检测方法应具备如下条件：特异性强，敏感度高，重复性好， 快速简便，定量分析。实时荧光定量聚合酶链反应技术(Real．time fluorescent Quantitative 思路。 基因的表达，探索SALL4基因是否为恶性血液肿瘤的标记之一。 中文摘要 目的：1．建立实时荧光定量PCR检测SALL4基因的方法。 2．检测不同类型恶性血液肿瘤患者体内SALL4基因的表达情况。 院住院患者及门诊体检者，共88例(恶性血液肿瘤患者77例和11例对 验组所有病例经临床及实验室检查确诊，包括：46例原发性白血病患者(急 性非淋巴细胞白血病2l例，急性淋巴细胞白血病12例，慢性粒细胞白血 细胞非霍奇金淋巴瘤4例，B细胞非霍奇金淋巴瘤8例)、8例多发性骨 髓瘤患者。11例健康者骨髓标本为实验对照组。 2．实时荧光定量PCR检测SALL4基因的转录水平。 ①患者骨髓标本采集和骨髓中单个核细胞提取。 Acid，RNA)提取。 ②单个核细胞中核糖核酸(Ribonucleic ③逆转录反应合成互补脱氢核糖核(complementary acid，eDNA。) Deoxyribonucleic ④常规PCR反应，PCR产物构建质粒标准品。 ⑤实时荧光定量PCR方法相对定量检测SALL4基因转录水平。 3．统计学分析 认为差别具有统计学意义。 结果：1．SALL4基因在急性非淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血 病、慢性粒细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、骨髓增生异常综合征中有明显 的过表达，与正常对照组比较有统计学意义(PO．05)。 2．正常对照组、急性非淋巴细胞白血病组、急性淋巴细胞白血病组、 慢性粒细胞白血病组、骨髓增生异常综合征组、非霍奇金淋巴瘤组、多发 P0．01)。 3．多发性骨髓瘤患者和正常对照组的SALL4基因表达水平无显著性 差异pO．05)。 结论：1．FQ—PCR方法具有敏感性高，特异性强，重复性和稳定性