嘌呤受体亚型pylt;,2gt;在先天性巨结肠中的表达及意义.pdfVIP

·中文论著摘要· 嘌呤受体亚型P2Y2在先天性巨结肠中的表达及意义 刖 吾 先天性巨结肠(Hirschsprung’sdisease，HD)是婴幼儿常见的消化道畸形，是一 nervous 种肠神经系统(Entericsystem，ENS)发育异常的疾病。神经嵴源性细胞进入 肠道后逐渐迁移、增殖、受肠道微环境影响后停止增殖，逐渐聚集最终分化形成 神经节细胞及胶质细胞，构成肠神经节，在此过程中出现任何异常都可能导致神 经节细胞的缺失，最终形成HD。 三磷酸腺苷(Adenosine 经元的分化、迁移、存活，还可以促进神经元的修复，其作用的发挥必需与受体 有8个亚型，其中在胃肠道P2Y2亚型分布最为广泛。在肠神经系统内，P2Y受 体主要调节肌肉的松弛，在肠神经系统发育过程中如果P2Y2表达缺失可能导致肠 管的松弛功能障碍，从而使肠管处于持续痉挛状态，这揭示了P2Y2与HD的发生 存在一定关系，但P2Y2在HD肠管的表达及分布情况国内尚未见报导。 本研究通过观察HD患儿正常段、移行段和痉挛段内P2Y2受体的分布及相对 表达量，以正常段为对照组，移行段及痉挛段分别设为实验组1和实验组2，比 较相互之间P2Y2的分布及表达情况是否存在差异，进一步探讨这种差异在HD发 病机制中的意义。 材料与方法 一、病例标本 收集来自中国医科大学附属盛京医院小儿外科的30例经手术根治的HD患儿 天)，其中长段型5例，短段型6例，常见型19例。 二、实验试剂 P2Y2多克隆抗体(购自美国Abcam公司)；二步法山羊免疫组化检测试剂盒(购 自武汉博士德公司)；逆转录试剂盒(购自大连宝生物工程有限公司)。 三、实验方法 选取患儿肠管标本的正常段、移行段和痉挛段全层组织分别设为对照组、实 验组1及实验组2，通过免疫组化方法及RT-PCR方法观察P2Y2在各组中的分布 及表达，所有数据均以；±，表示，差异比较采用SPSS13．0统计软件分析，组问差 异采用方差分析，p0．05表示差异有统计学意义。 结果 一、免疫组化结果 在对照组及实验组1肠管标本的纵肌层、环肌层和肌间的神经丛中可见P2Y2 阳性细胞的分布及表达，与对照组相比较，实验组1中P2Y2阳性细胞的数目少且 免疫反应较弱，差异具有统计学意义(萨O．01)。实验组2肠管标本中则未见P2Y2 阳性细胞的分布及表达，与对照组相比差异明显(萨0．01)。 二、RT-PCR实验结果 mRNA均有表达，相 在对照组(正常段肠管)及实验组l(移行段肠管)中P2Y2 组1标本中P2Y2的表达具有显著性差异p分别为O．00，0．011)。 皇口结论◆匕 与正常段肠管组织相比，HD患儿病变段肠管中ATP受体P2Y2表达缺失或者 显著减低，P2Y2的表达缺失可能导致肠管的松弛功能障碍使肠管处于痉挛状态， 有可能在HD的发生过程中发挥了一定的作用。 关键词 先天性巨结肠；P2Y2受体；免疫组化； 逆转录聚合酶链反应 2 ·英文论著摘要· The and of P2Y2 ExpressionSignificance Purinergic in Disease ReceptorSubtypesHirschsprung’S Introduction acommon of Hirschsprung’