大蒜素对人宫颈hela细胞生物学行为的干预研究.pdf

目 录 1 大蒜素对人宫颈癌 HeLa 细胞生物学行为的干预研究……1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………4 1.3 前言……………………………………………………………7 1.4 材料与方法……………………………………………………10 1.5 结果……………………………………………………………24 1.6 讨论……………………………………………………………36 1.7 结论……………………………………………………………45 1.8 参考文献………………………………………………………46 2 致谢……………………………………………………………55 3 宫颈癌侧群细胞与肿瘤干细胞研究进展（综述） …………………………………………………………………56 大蒜素对人宫颈癌HeLa 细胞生物学行为的干预研究 导师：毛熙光 教授 研究生：陈建琼 摘 要 目的：探讨大蒜素是否具有抑制人宫颈癌 HeLa 细胞的增殖，诱 导其凋亡的作用，并从分子水平研究大蒜素对 HeLa 细胞生长调控机 制。 方法：将 HeLa 细胞分别与不同浓度大蒜素(2.5ug/ml、5ug/ml、 10ug/ml、20ug/ml 、40ug/ml 、80ug/ml、160ug/ml)共同培养 24h 、48h 、 72h 后，以 WST-1 法检测各组细胞 OD 值，计算细胞增殖抑制率；再 以不同浓度大蒜素(2.5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml 、40ug/ml 、 80ug/ml、160ug/ml)干预 HeLa 细胞 24h 及以相同浓度大蒜素(10ug/ml) 干预 HeLa 细胞 24h 、48h 和 72h，以流式细胞仪检测各组 HeLa 细胞 凋亡率并测定细胞周期G0/G1 期、S 期、G2/M 期所占比例。以20ug/ml 、 40ug/ml 、80ug/ml 大蒜素干预HeLa 细胞 24h 后，提取各组细胞总 RNA 和总蛋白，进行定量 RT-PCR 扩增，分析大蒜素对 β-catenin ，c-myc 及 cyclinDl mRNA 表达的影响；Western-blot 法分析大蒜素对 HeLa 细胞 β-catenin 蛋白表达的影响。以上实验均重复3 次，实验数据用x ±s 表示，采用 SPSS 17.0 软件统计分析，以 P ＜0.05 为有统计学意 义。 结果： WST-1 法发现，2.5-160ug/ml 浓度范围内的大蒜素作用 HeLa 细 胞 24-72h 后，细胞增殖抑制率由 24 ％上升至 82 ％，大蒜素对 HeLa 细胞增殖的抑制作用与大蒜素浓度及作用时间呈正相关关系，差异有 统计学意义(P0.05) 。提示大蒜素可抑制 HeLa 细胞增殖，其抑制作 用有浓度及时间依赖性。 流式细胞仪检测细胞凋亡率发现，2.5-160ug/ml 大蒜素作用 HeLa 细胞 24h 后，细胞凋亡率随大蒜素浓度增高而升高，由(8.54 ± 1.53)%上升至（63.06 ±5.32)% ；10ug/ml 大蒜素作用 HeLa 细胞 24h 、 48h 及 72h 后，细胞凋亡率由(9.37 ±1.39)%上升至(61.84 ±3.74)%， 差异有统计学意义(P0.05) 。提示大蒜素能促进 HeLa 细胞凋亡，并 且有浓度及时间依赖性。 以2.5-160ug/ml 大蒜素与 HeLa 细胞共同培养 24h 后发现，低于 10ug/ml 浓度大蒜素对 HeLa 细胞周期阻滞作用不明显；当大蒜素浓 度≥ 10ug/ml 时，处于 G0/G1 期的细胞由(38.2 ±1.62)%增多至(66.6 ± 3.25)%，处于 S 期细胞由(43.1 ±1.02)%减少至(24.8 ±1.19)%，差异具 有统计学意义(P0.05) 。以 10ug/ml 大蒜素作