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应用RNAi沉默VEGFR．2基因的表达 对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响 中文摘要 【目的】 本研究拟利用RNA干扰技术(IⅢAinterference，RNAi)，以血管内皮细胞生 长因子受体一2(VEGFR．2)的mRNA为靶点，设计、构建VEGFR-2shI斟A的真 路，探讨其对A549细胞增贿及凋亡的影响，从而为非小细胞肺癌(NSCLC)基因 治疗寻找新的靶点。 【方法】 (1)在Genbank查找VEGFR．2cDNA序列(NM002253)，按照RNAi的设计原则， 利用Ambion公司提供的设计软件，筛选出2个VEGFR．2的干扰靶点，同时 设计一个阴性对照，并设计出相应的短发央结构的I斟A模板。 (2)将互补配对的shIⅢA模板分别插入到pGenesil．1质粒中，构建3种重组质粒。 DNA测序验证重组克隆的正确性。 blot分析重组质粒对该基因蛋白质表达的抑制效果，同时筛选出沉默效果最 好的表达质粒。 (4)将筛选出的沉默效果最好的质粒再次转染A549细胞，CCK．8法检测细胞增 殖抑制情况，Hoechst染色检测细胞凋亡形态学变化。 【结果】 (1)测序结果显示：